Determinação de parâmetros estruturais e termodinâmicos da isoforma a-tripsina bovina em solventes aquo-orgânicos
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Data de Publicação: | 2017 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes) |
Texto Completo: | http://repositorio.ufes.br/handle/10/7866 |
Resumo: | Organic solvents are common in industrial processes that use enzymes but, at the same time, it is known that they change the properties thereof, thus the effects of aqueous-organic solvent (ethanol) in different concentration on the α-trypsin structure have been investigated by spectroscopic techniques and thermodynamic data analysis. The results from spectroscopic measurements, including far-UV Circular Dichroism, UV-Vis absorption spectroscopy, intrinsic tryptophan fluorescence and dynamic light scattering (DLS) suggest the formation of partially folded states, instead of aggregates states, at high ethanol concentration (> 60% v/v ethanol), with little loss of secondary structure, but with significant tertiary structure changes. The thermodynamic data (Tm and ∆H) suggest a loosen of intramolecular weak interactions, which reflects in a flexibility increase such that the catalytic capacity can be increased or decreased according to the ethanol concentration into the system. Overall results we suggest that in range of 0-60% v/v ethanol/buffer, α-trypsin undergoes reversible multimerization phenomena maintaining its catalytic activity. However from 60% v/v ethanol/buffer, population of folded partially states with less catalytic activity are predominant. |
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Gonçalves, Juliana Barbosa CoitinhoSantos, Alexandre Martins CostaRosa, Dayanne PinhoFernandes, Patrícia Machado BuenoCicilini, Maria AparecidaBem, Daniela Amorim Melgaço Guimaraes do2018-08-01T22:57:53Z2018-08-01T22:57:53Z2017-02-23Organic solvents are common in industrial processes that use enzymes but, at the same time, it is known that they change the properties thereof, thus the effects of aqueous-organic solvent (ethanol) in different concentration on the α-trypsin structure have been investigated by spectroscopic techniques and thermodynamic data analysis. The results from spectroscopic measurements, including far-UV Circular Dichroism, UV-Vis absorption spectroscopy, intrinsic tryptophan fluorescence and dynamic light scattering (DLS) suggest the formation of partially folded states, instead of aggregates states, at high ethanol concentration (> 60% v/v ethanol), with little loss of secondary structure, but with significant tertiary structure changes. The thermodynamic data (Tm and ∆H) suggest a loosen of intramolecular weak interactions, which reflects in a flexibility increase such that the catalytic capacity can be increased or decreased according to the ethanol concentration into the system. Overall results we suggest that in range of 0-60% v/v ethanol/buffer, α-trypsin undergoes reversible multimerization phenomena maintaining its catalytic activity. However from 60% v/v ethanol/buffer, population of folded partially states with less catalytic activity are predominant.Os solventes orgânicos são comuns em processos industriais que utilizam enzimas, mas, ao mesmo tempo, sabe-se que alteram suas propriedades. Assim, os efeitos do solvente orgânico aquoso (etanol) em diferentes concentrações na estrutura α- tripsina foram investigadas por técnicas espectroscópicas e análise de dados termodinâmicos. A espectroscopia de absorção UV-Vis, a fluorescência intrínseca do triptofano e o espalhamento dinâmico da luz (DLS) sugerem a formação de estados parcialmente dobrados, em vez de estados agregados, em alta concentração de etanol (> 60% v/v de etanol/tampão), exibindo pouca perda de estrutura secundária, mas alterações significativas na estrutura terciária. Os dados termodinâmicos (Tm e ∆H) sugerem um afrouxamento de interações intramoleculares fracas, o que se reflete em um aumento de flexibilidade de tal forma que a capacidade catalítica pode ser aumentada ou diminuída de acordo com a concentração de etanol no sistema. Os resultados globais sugerem que na faixa de 0-60% v/v de etanol/tampão, a α- tripsina sofre fenômenos de multimerização reversíveis, mantendo a sua atividade catalítica. No entanto a partir de 60% v/v de etanol/tampão, a população de estados parcialmente enovelados com menor atividade catalítica é predominante. Palavras chaves: tripsina, isoformas, enzimologia, solventes orgânicos, estrutura, termodinâmica.TextROSA, Dayanne Pinho. Determinação de parâmetros estruturais e termodinâmicos da isoforma a-tripsina bovina em solventes aquo-orgânicos. 2017. 62 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica e Farmacologia) - Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Farmacologia, Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2017.http://repositorio.ufes.br/handle/10/7866porUniversidade Federal do Espírito SantoMestrado em Bioquímica e FarmacologiaPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e FarmacologiaUFESBRCentro de Ciências da SaúdeTripsinaEnzimasTermodinâmicaProteínasFarmacologia Bioquímica e Molecular61Determinação de parâmetros estruturais e termodinâmicos da isoforma a-tripsina bovina em solventes aquo-orgânicosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes)instname:Universidade Federal do Espírito Santo (UFES)instacron:UFESORIGINALtese_10774_025 - DAYANNE PINHO ROSA - DISSERTAÇÃO DE MESTRADO - FINAL.pdfapplication/pdf805134http://repositorio.ufes.br/bitstreams/58edd293-4493-45a3-90c9-5b0de48bc61a/downloada0838bf2c2101acc6105315b494bc58aMD5110/78662024-06-27 11:04:50.249oai:repositorio.ufes.br:10/7866http://repositorio.ufes.brRepositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ufes.br/oai/requestopendoar:21082024-06-27T11:04:50Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes) - Universidade Federal do Espírito Santo (UFES)false |
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