Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Menezes, Thiago Nunes de
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes)
Texto Completo: http://repositorio.ufes.br/handle/10/8027
Resumo: The role of plasmatic lipids in the chronic disease may be associated with oxidative stress, which is characterized by redox imbalance. Proteins are molecules involved in almost all biological phenomena and the understanding of the protein regulation may be a source of new therapeutic strategies. Thus, the aim of the present work was analyse the mitochondrial protein expression in 18-weeks old sildenafil-treated apoE-/- mice as compared to non-treated animals. Previously, the apoE-/- mice presented a plasma lipid profile characteristic of dyslipidemia, and the triacylglycerol, total cholesterol, LDL and VLDL levels were 5, 14, 6 and 36 times higher than observed from control group (C57), which was not reverted by treatment with sildenafil. Flow cytometry showed in liver cells increased levels of intracellular reactive oxygen species of superoxide anion (~82%), hydrogen peroxide (~60%), peroxinitrite (~53%) as well as increased apoptotic cells (from ~2% to ~19%). The treatment was able to prevent the production of analysed ROS and reduced the apoptotic cells, restoring the pattern observed in C57 group. It suggests that sildenafil presents an antioxidant action. Differential two-dimensional electrophoresis coupled with mass spectrometry was applied to study the changes in mitochondrial protein profile in both conditions.
id UFES_73cec2412893ebbfbe5c3595a90dfe09
oai_identifier_str oai:repositorio.ufes.br:10/8027
network_acronym_str UFES
network_name_str Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes)
repository_id_str 2108
spelling Orientador1https://orcid.org/http://lattes.cnpq.br/Menezes, Thiago Nunes deBorges, Márcia HelenaVasquez, Elisardo CorralFronza, MarcioBissoli, Nazare Souza2018-08-01T22:59:12Z2018-08-012018-08-01T22:59:12Z2017-05-19The role of plasmatic lipids in the chronic disease may be associated with oxidative stress, which is characterized by redox imbalance. Proteins are molecules involved in almost all biological phenomena and the understanding of the protein regulation may be a source of new therapeutic strategies. Thus, the aim of the present work was analyse the mitochondrial protein expression in 18-weeks old sildenafil-treated apoE-/- mice as compared to non-treated animals. Previously, the apoE-/- mice presented a plasma lipid profile characteristic of dyslipidemia, and the triacylglycerol, total cholesterol, LDL and VLDL levels were 5, 14, 6 and 36 times higher than observed from control group (C57), which was not reverted by treatment with sildenafil. Flow cytometry showed in liver cells increased levels of intracellular reactive oxygen species of superoxide anion (~82%), hydrogen peroxide (~60%), peroxinitrite (~53%) as well as increased apoptotic cells (from ~2% to ~19%). The treatment was able to prevent the production of analysed ROS and reduced the apoptotic cells, restoring the pattern observed in C57 group. It suggests that sildenafil presents an antioxidant action. Differential two-dimensional electrophoresis coupled with mass spectrometry was applied to study the changes in mitochondrial protein profile in both conditions.Um dos mecanismos propostos sobre o papel dos lipídios plasmáticos na gênese de doenças, é a sua associação com o estresse oxidativo, caracterizado pelo desbalanço redox, e que pode direta ou indiretamente estar relacionado à fisiopatologia das doenças crônicas não transmissíveis. Proteínas são moléculas envolvidas em praticamente todos os fenômenos biológicos, e o entendimento dos fatores que regulam a sua expressão, pode abrir portas para novas estratégias terapêuticas. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar alterações no proteoma mitocondrial de células do fígado (CF) de camundongos apoE knockout (apoE -/-) tratados com sildenafil. Previamente foi evidenciado que os animais apoE -/- apresentam perfil lipídico plasmático característico das dislipidemias, apresentando concentrações plasmáticas médias para triglicerídeos, colesterol total, LDL e VLDL de 5, 14, 6 e 36 vezes maiores que aquelas observadas para o grupo C57, respectivamente. Este aumento não foi revertido após o tratamento. A citometria de fluxo mostrou elevação nos níveis intracelulares nas CF dos animais apoE -/- de ânion superóxido (~82%), peróxido de hidrogênio (~60%) e peroxinitrito (~53%), além do aumento do número de células em apoptose (de ~2% para ~19%). Nossos resultados mostraram que o tratamento com sildenafil previne o aumento das ROS analisadas e inibe a indução de apoptose, sugerindo que o sildenafil possui ação antioxidante. A análise do proteoma mitocondrial por eletroforese bidimensional acoplada à espectrometria de massa (2DE-MS) das CF, mostrou que em ambas as condições experimentais (doença e tratamento), houve mudança no padrão de expressão das proteínas nesse compartimento subcelular. Destaque para o aumento da expressão da urato oxidase no grupo dos animais tratados (~93%) quando comparados com os sem tratamento. Esta enzima é responsável pela degradação do ácido úrico e pode apresentar papel importante na redução da produção de ROS. Os resultados também mostraram que a dislipidemia induz o aumento da transferrina, uma proteína de transporte de Fe, que ao aumentar a oferta desse metal, pode aumentar a formação de H2O2 pela reação de Fenton, contribuindo para o estresse oxidativo. Foi possível observar, entretanto, que o sildenafil reduz (~70%) os níveis dessa proteína quando comparado com o grupo apoE -/- , indicando equilíbrio redox após o tratamento. Após o estudo proteômico mitocondrial, foi possível observar a influência do tratamento com sildenafil na regulação de proteínas-chave na homeostase redox, contribuindo para a compreensão dos mecanismos pelos quais o sildenafil apresenta o efeito antioxidante.TextMENEZES, Thiago Nunes de. Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil. 2017. . Tese (Doutorado em Ciências Fisiológicas) - Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2017.http://repositorio.ufes.br/handle/10/8027porUniversidade Federal do Espírito SantoDoutorado em Ciências FisiológicasPrograma de Pós-Graduação em Ciências FisiológicasUFESBRCentro de Ciências da SaúdeSildenafilOxidative stressMitochondrial proteomeDislipidemiaEstresse oxidativoProteoma mitocondrialProteomaCélulasFígadoCamundongo como animal de laboratórioSildenafilFisiologia612Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafilinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes)instname:Universidade Federal do Espírito Santo (UFES)instacron:UFESORIGINALTese_Thiago Nunes de Menezes.pdfapplication/pdf2622118http://repositorio.ufes.br/bitstreams/5d71f45b-76ce-4916-8dd9-5426a832cc7e/download928b0bda816ba313392a848d9aba733eMD5110/80272024-06-27 11:06:55.279oai:repositorio.ufes.br:10/8027http://repositorio.ufes.brRepositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ufes.br/oai/requestopendoar:21082024-06-27T11:06:55Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes) - Universidade Federal do Espírito Santo (UFES)false
dc.title.none.fl_str_mv Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil
title Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil
spellingShingle Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil
Menezes, Thiago Nunes de
Sildenafil
Oxidative stress
Mitochondrial proteome
Dislipidemia
Estresse oxidativo
Proteoma mitocondrial
Fisiologia
Proteoma
Células
Fígado
Camundongo como animal de laboratório
Sildenafil
612
title_short Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil
title_full Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil
title_fullStr Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil
title_full_unstemmed Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil
title_sort Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil
author Menezes, Thiago Nunes de
author_facet Menezes, Thiago Nunes de
author_role author
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Orientador1
dc.contributor.advisor1ID.fl_str_mv https://orcid.org/
dc.contributor.advisor1Lattes.fl_str_mv http://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.author.fl_str_mv Menezes, Thiago Nunes de
dc.contributor.referee1.fl_str_mv Borges, Márcia Helena
dc.contributor.referee2.fl_str_mv Vasquez, Elisardo Corral
dc.contributor.referee3.fl_str_mv Fronza, Marcio
dc.contributor.referee4.fl_str_mv Bissoli, Nazare Souza
contributor_str_mv Orientador1
Borges, Márcia Helena
Vasquez, Elisardo Corral
Fronza, Marcio
Bissoli, Nazare Souza
dc.subject.eng.fl_str_mv Sildenafil
Oxidative stress
Mitochondrial proteome
topic Sildenafil
Oxidative stress
Mitochondrial proteome
Dislipidemia
Estresse oxidativo
Proteoma mitocondrial
Fisiologia
Proteoma
Células
Fígado
Camundongo como animal de laboratório
Sildenafil
612
dc.subject.por.fl_str_mv Dislipidemia
Estresse oxidativo
Proteoma mitocondrial
dc.subject.cnpq.fl_str_mv Fisiologia
dc.subject.br-rjbn.none.fl_str_mv Proteoma
Células
Fígado
Camundongo como animal de laboratório
Sildenafil
dc.subject.udc.none.fl_str_mv 612
description The role of plasmatic lipids in the chronic disease may be associated with oxidative stress, which is characterized by redox imbalance. Proteins are molecules involved in almost all biological phenomena and the understanding of the protein regulation may be a source of new therapeutic strategies. Thus, the aim of the present work was analyse the mitochondrial protein expression in 18-weeks old sildenafil-treated apoE-/- mice as compared to non-treated animals. Previously, the apoE-/- mice presented a plasma lipid profile characteristic of dyslipidemia, and the triacylglycerol, total cholesterol, LDL and VLDL levels were 5, 14, 6 and 36 times higher than observed from control group (C57), which was not reverted by treatment with sildenafil. Flow cytometry showed in liver cells increased levels of intracellular reactive oxygen species of superoxide anion (~82%), hydrogen peroxide (~60%), peroxinitrite (~53%) as well as increased apoptotic cells (from ~2% to ~19%). The treatment was able to prevent the production of analysed ROS and reduced the apoptotic cells, restoring the pattern observed in C57 group. It suggests that sildenafil presents an antioxidant action. Differential two-dimensional electrophoresis coupled with mass spectrometry was applied to study the changes in mitochondrial protein profile in both conditions.
publishDate 2017
dc.date.issued.fl_str_mv 2017-05-19
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2018-08-01T22:59:12Z
dc.date.available.fl_str_mv 2018-08-01
2018-08-01T22:59:12Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.citation.fl_str_mv MENEZES, Thiago Nunes de. Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil. 2017. . Tese (Doutorado em Ciências Fisiológicas) - Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2017.
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://repositorio.ufes.br/handle/10/8027
identifier_str_mv MENEZES, Thiago Nunes de. Análise do proteoma mitocondrial de células do fígado de camundongos apoE knockout tratados com sildenafil. 2017. . Tese (Doutorado em Ciências Fisiológicas) - Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2017.
url http://repositorio.ufes.br/handle/10/8027
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv Text
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade Federal do Espírito Santo
Doutorado em Ciências Fisiológicas
dc.publisher.program.fl_str_mv Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas
dc.publisher.initials.fl_str_mv UFES
dc.publisher.country.fl_str_mv BR
dc.publisher.department.fl_str_mv Centro de Ciências da Saúde
publisher.none.fl_str_mv Universidade Federal do Espírito Santo
Doutorado em Ciências Fisiológicas
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes)
instname:Universidade Federal do Espírito Santo (UFES)
instacron:UFES
instname_str Universidade Federal do Espírito Santo (UFES)
instacron_str UFES
institution UFES
reponame_str Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes)
collection Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes)
bitstream.url.fl_str_mv http://repositorio.ufes.br/bitstreams/5d71f45b-76ce-4916-8dd9-5426a832cc7e/download
bitstream.checksum.fl_str_mv 928b0bda816ba313392a848d9aba733e
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da Universidade Federal do Espírito Santo (riUfes) - Universidade Federal do Espírito Santo (UFES)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1804309169463885824