Avaliação biocorrosiva de bactérias redutoras de sulfato: possível aplicação na remoção de instrumentos endodônticos fraturados
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Data de Publicação: | 2014 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF) |
Texto Completo: | https://app.uff.br/riuff/handle/1/11813 |
Resumo: | Os diversos métodos utilizados na remoção de limas endodônticas fraturadas do conduto radicular não asseguram o sucesso. O objetivo deste estudo foi desenvolver o biofarmaco BACCOR e determinar sua ação biocorrosiva em limas endodônticas Kerr. Material e métodos: isolamento e a reidentificação biomolecular em Bactérias Redutoras de Sulfato (BRS); obtenção do veiculo de inoculação do BACCOR, baseando-se no meio Postgate C e E, com variações na concentração de Agar-agar e de carragena, verificando-se a viabilidade celular das cepas de BRS nestes veículos nos tempos de 30, 45 e 70 dias; determinação da cinética de crescimento microbiano das BRS em aerobiose e anaerobiose; testes de citotoxicidade in vitro, teste MTT, em linhagens celulares L929 e Vero, por 24 horas, nos veículos de inoculação do BACCOR, em limas endodônticas Kerr usadas pulverizadas, sobrenadante e pellet celular do crescimento bacteriano de 7 e 42 dias de cultivo; avaliação da biocorrosão e da formação de biofilme em limas endodônticas usadas imersas por 445 dias em cultivos de BRS seguidos de diferentes períodos de reimersão e avaliadas em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV) e Microscópio Confocal de Varredura a Laser (MCVL); desenvolvimento de um protocolo para avaliação in vitro da formação de biofilme do BACCOR em limas endodônticas em canais radiculares em dentes humanos. Resultados: das 11 cepas foi identificado Desulfovibrio desulfuricans; a formulação que apresentou melhor escoamento foi a carragena Iota a 0,5% g/l; a cinética de crescimento microbiano demonstrou que as BRS são viáveis em aeróbiose; o teste MTT sugeriu ser citotóxico o Agar-agar (veículos) e o meio de cultura Postgate E sem Agar-agar apresentaram melhor viabilidade celular nas duas linhagens empregadas em todos os grupos de avaliação; maiores concentrações de limas endodônticas pulverizadas represaram menores níveis de viabilidade celular; após o tempo de 445 dias foi verificada a presença de biofilme de BRS através do MCVL e MEV; após a decapagem foram verificadas áreas sugestivas de pite de corrosão nas limas endodônticas; o protocolo de avaliação em canais radiculares sugeriu a presença de BRS sobre a superficie das limas endodônticas e áreas sugestivas de corrosão. Os resultados indicam que as BRS são bactérias fastidiosas, requerendo diferentes técnicas para alcançar o seu isolamento; o emprego carragena iota apresentou melhores características nos meios de cultura; as BRS são bactérias anaeróbicas facultativas ou aerotolerantes e não estritas como defende a maior parte da literatura; a presença do Agar-agar sugere um efeito citotóxico, sendo o meio de cultura Postgate E sem Agar-agar o com menor efeito citotóxico; os produtos bacterianos das BRS, sem a ocorrência de biocorrosão, sobrenadante e pellet celular, são biologicamente aceitáveis; as BRS podem apresentar crescimento no interior de canais radiculares in vitro, apresentando afinidade a superfície metálica da lima endodôntica presente no canal radicular |
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Material e métodos: isolamento e a reidentificação biomolecular em Bactérias Redutoras de Sulfato (BRS); obtenção do veiculo de inoculação do BACCOR, baseando-se no meio Postgate C e E, com variações na concentração de Agar-agar e de carragena, verificando-se a viabilidade celular das cepas de BRS nestes veículos nos tempos de 30, 45 e 70 dias; determinação da cinética de crescimento microbiano das BRS em aerobiose e anaerobiose; testes de citotoxicidade in vitro, teste MTT, em linhagens celulares L929 e Vero, por 24 horas, nos veículos de inoculação do BACCOR, em limas endodônticas Kerr usadas pulverizadas, sobrenadante e pellet celular do crescimento bacteriano de 7 e 42 dias de cultivo; avaliação da biocorrosão e da formação de biofilme em limas endodônticas usadas imersas por 445 dias em cultivos de BRS seguidos de diferentes períodos de reimersão e avaliadas em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV) e Microscópio Confocal de Varredura a Laser (MCVL); desenvolvimento de um protocolo para avaliação in vitro da formação de biofilme do BACCOR em limas endodônticas em canais radiculares em dentes humanos. Resultados: das 11 cepas foi identificado Desulfovibrio desulfuricans; a formulação que apresentou melhor escoamento foi a carragena Iota a 0,5% g/l; a cinética de crescimento microbiano demonstrou que as BRS são viáveis em aeróbiose; o teste MTT sugeriu ser citotóxico o Agar-agar (veículos) e o meio de cultura Postgate E sem Agar-agar apresentaram melhor viabilidade celular nas duas linhagens empregadas em todos os grupos de avaliação; maiores concentrações de limas endodônticas pulverizadas represaram menores níveis de viabilidade celular; após o tempo de 445 dias foi verificada a presença de biofilme de BRS através do MCVL e MEV; após a decapagem foram verificadas áreas sugestivas de pite de corrosão nas limas endodônticas; o protocolo de avaliação em canais radiculares sugeriu a presença de BRS sobre a superficie das limas endodônticas e áreas sugestivas de corrosão. Os resultados indicam que as BRS são bactérias fastidiosas, requerendo diferentes técnicas para alcançar o seu isolamento; o emprego carragena iota apresentou melhores características nos meios de cultura; as BRS são bactérias anaeróbicas facultativas ou aerotolerantes e não estritas como defende a maior parte da literatura; a presença do Agar-agar sugere um efeito citotóxico, sendo o meio de cultura Postgate E sem Agar-agar o com menor efeito citotóxico; os produtos bacterianos das BRS, sem a ocorrência de biocorrosão, sobrenadante e pellet celular, são biologicamente aceitáveis; as BRS podem apresentar crescimento no interior de canais radiculares in vitro, apresentando afinidade a superfície metálica da lima endodôntica presente no canal radicularThe various methods used in the removal of fractured endodontic root canal files do not ensure success. The aim of this study was to develop biopharmaceutical BACCOR and determine its action biocorrosiva endodontic files Kerr. Material and Methods: Isolation and biomolecular reidentification in sulfate-reducing bacteria (SRB); obtaining vehicle BACCOR inoculation, based on the medium Postgate C and E, with changes in concentration of agar-agar and carrageenan; checking the cell viability of the strains of these SRB vehicles in times of 30 , 45 and 70 days; determination of the kinetics of microbial growth of SRB in aerobic and anaerobic conditions; cytotoxicity tests in vitro, MTT assay in L929 and Vero cell lines for 24 hours, in vehicles inoculation BACCOR, in endodontic files used sprayed Kerr, supernatant and cell pellet of bacterial growth by 7 and 42 days of culture; evaluation biocorrosion and biofilm formation used in endodontic files immersed for 445 days in cultured SRB followed by different periods of immersion and evaluated in a scanning electron microscope (SEM) and confocal laser scanning microscope (CLSM); development of a protocol for evaluation of in vitro biofilm formation of BACCOR in endodontic files in root canals in human teeth. Results: 11 strains of Desulfovibrio desulfuricans was identified; the formulation showed better properties Iota carrageenan was 0.5% g/l; the kinetics of microbial growth demonstrated that the SRB are viable under aerobic conditions; the MTT assay suggested that the cytotoxic Agar-agar (vehicles) and the culture medium Postgate E without Agar - agar showed better cell viability in both strains employed in all assessment groups; higher concentrations of sprayed endodontic files dammed lower levels of cell viability; after time of 445 days was verified the presence of biofilm SRB by CLSM and SEM; after stripping areas suggestive of pitting corrosion were observed in endodontic files; the evaluation protocol in root canals suggested the presence of SRB on the surface of endodontic files and suggestive areas of corrosion. The results indicate that the SRB are fastidious bacteria, requiring different techniques to achieve isolation; employment iota carrageenan showed better characteristics in culture media; SRB are facultative anaerobic bacteria or aerotolerantes and not as strict defends most of the literature; The presence of agar-agar suggesting a cytotoxic effect, and Postgate's medium E without the agar-agar culture with less cytotoxic effect; bacterial products from SRB, without the occurrence of biocorrosion, supernatant and cell pellet, are biologically acceptable; SRB can show growth within the root canal in vitro, showing affinity to metal surface of endodontic file present in the root canal260f.Dias, Eliane PedraSilva Junior, ArleyAlves, Flavio Rodrigues FerreiraHidalgo, Gelsa Edith NavarroCastro, Helena C.Cravo Junior, Walter BarreiroGonçalves, Lúcio de SouzaLutterbach, Marcia Teresa Soareshttp://lattes.cnpq.br/0941800906358933http://lattes.cnpq.br/4383696340593005http://lattes.cnpq.br/2045571069257485http://lattes.cnpq.br/9066619136266441http://lattes.cnpq.br/9843478434929592http://lattes.cnpq.br/2502637963842360http://lattes.cnpq.br/5790721699925597Heggendorn, Fabiano Luiz2019-10-29T11:36:43Z2019-10-29T11:36:43Z2014info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfHEGGENDORN, Fabiano Luiz. 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