Influência de polimorfismos genéticos sobre a atividade da enzima hidroximetilbilano sintase

• Autor(a) principal: Gonzaga, Ana Denise Gomes
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
• Texto Completo: https://app.uff.br/riuff/handle/1/9429
• topic: Hidroximetilbilano sintase; Polimorfismos genéticos; Atividade enzimática; PAI; Polimorfismo (Genética); Porfiria aguda intermitente; Hidroximetilbilano sintase; Hydroxymethylbilane synthase; Genetics polymorphisms; Enzymatic

A porfiria aguda intermitente, uma doença autossômica dominante, resulta da redução da atividade de uma enzima que participa da via biossintética do heme, a hidroximetilbilano sintase. A doença pode ser diagnosticada por métodos bioquímicos, por meio da detecção do aumento da produção e da excreção de precursores das porfirinas na urina, por meio da determinação da atividade enzimática por espectrofotometria e espectrofluorimetria e por métodos moleculares. Um estudo piloto revelou que os valores da atividade da hidroximetilbilano sintase se sobrepõem em indivíduos normais e portadores de porfiria aguda intermitente. Neste estudo, foram avaliados 80 doadores do Banco de Sangue do Hospital Universitário Antônio Pedro e 124 indivíduos de quatro famílias com histórico de porfiria aguda intermitente. O objetivo principal foi avaliar a influência de polimorfismos genéticos sobre a expressão fenotípica da hidroximetilbilano sintase.Os objetivos específicos foram estudar a freqüência dos polimorfismos genéticos no gene e analisar se estes polimorfismos apresentam alguma influência sobre a redução da atividade da hidroximetilbilano sintase. Anteriormente, amostras de sangue total foram coletadas para isolamento do DNA genômico pelo método de precipitação salina e avaliação da atividade enzimática no hemolisado, que foi quantificada por espectrofotometria e por espectrofluorimetria. Os indivíduos foram classificados em deficientes e não deficientes por valores de referência estabelecidos nestes métodos. As famílias com histórico de porfiria aguda intermitente tiveram a mutação definida por PCR-SSCP e seqüenciamento em um estudo anterior. Os portadores foram identificados no padrão SSCP. Foram analisados os polimorfismos C2377A (Apa LI), A2478G (Bst NI), G1345A (Msp I) e T1500C (Pst I) no intron 1; A3581G (Bsm AI) no intron 3 e C7064A (Hinf I), no intron 10, no gene que codifica a enzima hidroximetilbilano sintase, por PCR-RFLP. No grupo de doadores de sangue, as freqüências alélicas para os seis polimorfismos foram semelhantes àquelas encontradas na população geral. Ao comparar a distribuição alélica entre as famílias e os doadores, houve diferença significativa para os seis polimorfismos na família D, para os polimorfismos G1345A, A3581G e C7064A na família B e A2478G e G1345A na família SP. A distribuição dos genótipos dos polimorfismos C2377A, A2478G, G1345A, A3581G e C7064A em famílias com histórico de porfiria aguda intermitente foi significativamente diferente da distribuição encontrada para os doadores de sangue, indicando que estes polimorfismos podem ser considerados marcadores genéticos para estas famílias. O alelo A do polimorfismo C7064A apresentou a freqüência de 59% na família B e segregou com a mutação L338P, causadora da doença nesta família. A distribuição genotípica e alélica dos polimorfismos C2377A, A2478G e T1500C variou nos grupos deficientes e não deficientes enzimáticos, de forma que estes polimorfismos contribuíram para o fenótipo redução da atividade enzimática. A distribuição dos polimorfismos encontrada nas famílias com histórico da doença, não contribui para explicar a sobreposição da atividade enzimática em portadores e não portadores de doença