Padronização da técnica de reação em cadeia da polimerase para diagnóstico do Papilomavírus humano

• Autor(a) principal: Ortolani, Lais Gonçalves
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFGD
• Texto Completo: http://repositorio.ufgd.edu.br/jspui/handle/prefix/4427
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Reação em Cadeia da Polimerase; Papiloma; Polymerase Chain Reaction

A infecção genital pelo papilomavírus humano (Human Papillomavims — HPV) é a mais frequente doença sexualmente transmissível (DST) na mulher e no homem. Existem mais de 200 tipos diferentes identificados de HPV, entre os quais mais de 100 estão completamente sequenciados geneticamente e mais de 120 com sequenciamento parcial. Os HPVs são classificados de acordo com a capacidade de alteração na regulação celular, sendo divididos em grupos de baixo, intermediário e alto risco. Os métodos usados na detecção do DNA do HPV em lesões valiam amplamente na sua sensibilidade e especificidade. Objetivos: Este trabalho teve por objetivo padronizar a técnica de reação em cadeia da polimerase - PCR, no laboratório de biologia molecular pertencente à Faculdade de Ciências da Saúde da Universidade Federal da Grande Dourados para o diagnóstico das papilomatoses humanas. Metodologia: A partir de amostras de mucosa oriundas do banco de amostras do Laboratório de Microbiologia Aplicada da Faculdade de Ciências da Saúde teve início os processos de extração e detecção do vírus pela técnica de reação em cadeia da polimerase. Para a extração do DNA foram testados três protocolos distintos, seguindo os protocolos indicados para DNAzoI Tm, TRIzol TM e extração MiniPrep . Elegeu-se a técnica de PCR com os pfimers MY09/MY1 e GH20/GH21. Os produtos da PCR foram submetidos à eletroforese em gel de agarose a 3% e os fragmentos foram visualizados sob luz ultravioleta (UV) no transluminador. Resultados: Das quatro amostras analisadas, todas amplificaram o gene controle da I3-globina humana Assim, a análise da presença do DNA do HPV foi efetuada em todas as amostras, que foram submetidas à técnica de PCR e se mostraram positivas.