Análise da formação de corpúsculos lipídicos, síntese de mediadores inflamatórios e perfil de macrófagos murinos em modelos de interação com células tumorais in vitro
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Data de Publicação: | 2021 |
Tipo de documento: | Tese |
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Texto Completo: | https://doi.org/10.34019/ufjf/te/2021/00112 https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/14040 |
Resumo: | O câncer é uma doença de abrangência global, sendo a segunda causa de morte na população. A lipogênese e a presença de inúmeros corpúsculos lipídicos (CL’s) são observações patológicas vistas em neoplasias. CL’s são organelas constituídas por lipídeos neutros e envoltas por uma monocamada de fosfolipídeos, e exercem funções como produção de mediadores inflamatórios; seu maior número em tumores está associado com a angiogênese e progressão neoplásica. O objetivo deste estudo foi avaliar a formação de CL’s e a síntese de mediadores inflamatórios em linhagens tumorais mamárias e em macrófagos estimulados com meio condicionado de 4T1 e 67NR, além de averiguar o perfil de macrófagos no modelo de interação câncer e célula imune. Linhagens tumorais mamárias metastática (4T1) e não metastática (67NR) foram mantidas em cultura sob condição padrão e; macrófagos (Mø) peritoneais foram retirados de camundongos C57BL/6, recebendo posteriormente os pré-tratamentos com 1μM de GW, 5μM de rosiglitazona e 20nM de Rapamicina. Após 30 minutos os Mø foram estimulados com os meio condicionado das linhagens tumorais mamárias 67NR e 4T1, e acrescidos com o tratamento com GW, rosiglitazona, rapamicina ou 100nM de vitamina D (VD). Dados apontaram na citotoxicidade desencadeada pela VD na linhagem metastática 4T1 nos tempos analisados, além de sua administração reduzir a formação de CL’s em macrófagos estimulados. Com relação ao uso do agonista (rosiglitazona) e antagonista (GW9662) do PPARγ, fora observado um aumento na formação de CL’s mediado pelo uso da rosiglitazona, ao passo que a redução dessa organela foi observada e forma significativa, no tratamento com GW9662. Preliminarmente a utilização da rapamicina, inibidor via mTOR, demonstrou reduzir a síntese de CL’s nas linhagens tumorais mamárias, e o mesmo fenômeno foi notado em macrófagos estimulados com o sobrenadante das linhagens tumorais em ambos os tempos analisados. Citocinas pró e anti-inflamatórias foram dosadas no sobrenadante de macrófagos tratados com rapamicina, demonstrando que a inibição da biogênese de corpúsculos lipídicos é independente da ativação de NF-κB, além de demonstrar uma modulação na resposta de Mø estimulados com a linhagem metastática (4T1) é dependente de tempo, uma vez que, a responsividade antitumoral ocorreu no tempo de 48horas. A utilização desses fármacos demonstrou ser efetivo na modulação do metabolismo lipídico, e corroboram para novas estratégias terapêuticas em neoplasias |
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O objetivo deste estudo foi avaliar a formação de CL’s e a síntese de mediadores inflamatórios em linhagens tumorais mamárias e em macrófagos estimulados com meio condicionado de 4T1 e 67NR, além de averiguar o perfil de macrófagos no modelo de interação câncer e célula imune. Linhagens tumorais mamárias metastática (4T1) e não metastática (67NR) foram mantidas em cultura sob condição padrão e; macrófagos (Mø) peritoneais foram retirados de camundongos C57BL/6, recebendo posteriormente os pré-tratamentos com 1μM de GW, 5μM de rosiglitazona e 20nM de Rapamicina. Após 30 minutos os Mø foram estimulados com os meio condicionado das linhagens tumorais mamárias 67NR e 4T1, e acrescidos com o tratamento com GW, rosiglitazona, rapamicina ou 100nM de vitamina D (VD). Dados apontaram na citotoxicidade desencadeada pela VD na linhagem metastática 4T1 nos tempos analisados, além de sua administração reduzir a formação de CL’s em macrófagos estimulados. 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A utilização desses fármacos demonstrou ser efetivo na modulação do metabolismo lipídico, e corroboram para novas estratégias terapêuticas em neoplasiasCancer is a disease of global scope, being the second leading cause of death in the population. Lipogenesis and the presence of numerous lipid bodies (LBs) are pathological observations seen in neoplasms. LBs are organelles composed of neutral lipids and surrounded by a phospholipid monolayer, and exert functions such as production of inflammatory mediators; their increased number in tumors is associated with angiogenesis and neoplastic progression. The aim of this study was to evaluate LBs formation and synthesis of inflammatory mediators in mammary tumor cell lines and in macrophages stimulated with 4T1 and 67NR conditioned medium, and to investigate the profile of macrophages in the cancer-immune cell interaction model. Metastatic (4T1) and non-metastatic (67NR) mammary tumor cell lines were maintained in culture under standard condition and; peritoneal macrophages (Mø) were taken from C57BL/6 mice, subsequently receiving pretreatments with 1μM GW, 5μM rosiglitazone and 20nM Rapamycin. After 30 minutes the Mø were stimulated with the conditioned media of the 67NR and 4T1 mammary tumor cell lines, and incresead with the treatment with GW, rosiglitazone, rapamycin or 100nM vitamin D (VD). Data pointed out in the cytotoxicity triggered by VD in the metastatic lineage 4T1 in the analyzed times, besides its administration reducing the formation of LBs in stimulated macrophages. Regarding the use of PPARγ agonist (rosiglitazone) and antagonist (GW9662), an increase in LB formation mediated by the use of rosiglitazone was observed, while the reduction of this organelle was significantly observed in the treatment with GW9662. Preliminarily, the use of rapamycin, an mTOR inhibitor, was shown to reduce LB synthesis in mammary tumor cell lines, and the same phenomenon was noted in macrophages stimulated with the supernatant of tumor cell lines in both analyzed times. Pro- and anti- inflammatory cytokines were dosed in the supernatant of macrophages treated with rapamycin, demonstrating that the inhibition of lipid body biogenesis is independent of NF-κB activation, besides demonstrating a modulation in the response of Mø stimulated with the metastatic lineage (4T1) is timedependent, since the antitumor responsiveness occurred within 48 hours. The use of these drugs proved to be effective in modulating lipid metabolism, and corroborate new therapeutic strategies in neoplasms.porUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e BiotecnologiaUFJFBrasilICB – Instituto de Ciências Biológicashttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICASCâncerCorpúsculo lipídicomTOR. PPARγVitamina DCancerLipid bodiesAnálise da formação de corpúsculos lipídicos, síntese de mediadores inflamatórios e perfil de macrófagos murinos em modelos de interação com células tumorais in vitroinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisreponame:Repositório Institucional da UFJFinstname:Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)instacron:UFJFCC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14040/1/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14040/2/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52ORIGINALlairiscunhacampos.pdflairiscunhacampos.pdfapplication/pdf8460945https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14040/3/lairiscunhacampos.pdf4c0f4faf2100109c040af8959b891373MD53TEXTlairiscunhacampos.pdf.txtlairiscunhacampos.pdf.txtExtracted texttext/plain176755https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14040/4/lairiscunhacampos.pdf.txta2e41d9e46ed0be29ff60df757948e86MD54THUMBNAILlairiscunhacampos.pdf.jpglairiscunhacampos.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1296https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14040/5/lairiscunhacampos.pdf.jpgee2793c4483a5be2fe6b2ced5012e59eMD55ufjf/140402023-11-15 04:03:50.628oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/14040Tk9URTogUExBQ0UgWU9VUiBPV04gTElDRU5TRSBIRVJFClRoaXMgc2FtcGxlIGxpY2Vuc2UgaXMgcHJvdmlkZWQgZm9yIGluZm9ybWF0aW9uYWwgcHVycG9zZXMgb25seS4KCk5PTi1FWENMVVNJVkUgRElTVFJJQlVUSU9OIExJQ0VOU0UKCkJ5IHNpZ25pbmcgYW5kIHN1Ym1pdHRpbmcgdGhpcyBsaWNlbnNlLCB5b3UgKHRoZSBhdXRob3Iocykgb3IgY29weXJpZ2h0Cm93bmVyKSBncmFudHMgdG8gRFNwYWNlIFVuaXZlcnNpdHkgKERTVSkgdGhlIG5vbi1leGNsdXNpdmUgcmlnaHQgdG8gcmVwcm9kdWNlLAp0cmFuc2xhdGUgKGFzIGRlZmluZWQgYmVsb3cpLCBhbmQvb3IgZGlzdHJpYnV0ZSB5b3VyIHN1Ym1pc3Npb24gKGluY2x1ZGluZwp0aGUgYWJzdHJhY3QpIHdvcmxkd2lkZSBpbiBwcmludCBhbmQgZWxlY3Ryb25pYyBmb3JtYXQgYW5kIGluIGFueSBtZWRpdW0sCmluY2x1ZGluZyBidXQgbm90IGxpbWl0ZWQgdG8gYXVkaW8gb3IgdmlkZW8uCgpZb3UgYWdyZWUgdGhhdCBEU1UgbWF5LCB3aXRob3V0IGNoYW5naW5nIHRoZSBjb250ZW50LCB0cmFuc2xhdGUgdGhlCnN1Ym1pc3Npb24gdG8gYW55IG1lZGl1bSBvciBmb3JtYXQgZm9yIHRoZSBwdXJwb3NlIG9mIHByZXNlcnZhdGlvbi4KCllvdSBhbHNvIGFncmVlIHRoYXQgRFNVIG1heSBrZWVwIG1vcmUgdGhhbiBvbmUgY29weSBvZiB0aGlzIHN1Ym1pc3Npb24gZm9yCnB1cnBvc2VzIG9mIHNlY3VyaXR5LCBiYWNrLXVwIGFuZCBwcmVzZXJ2YXRpb24uCgpZb3UgcmVwcmVzZW50IHRoYXQgdGhlIHN1Ym1pc3Npb24gaXMgeW91ciBvcmlnaW5hbCB3b3JrLCBhbmQgdGhhdCB5b3UgaGF2ZQp0aGUgcmlnaHQgdG8gZ3JhbnQgdGhlIHJpZ2h0cyBjb250YWluZWQgaW4gdGhpcyBsaWNlbnNlLiBZb3UgYWxzbyByZXByZXNlbnQKdGhhdCB5b3VyIHN1Ym1pc3Npb24gZG9lcyBub3QsIHRvIHRoZSBiZXN0IG9mIHlvdXIga25vd2xlZGdlLCBpbmZyaW5nZSB1cG9uCmFueW9uZSdzIGNvcHlyaWdodC4KCklmIHRoZSBzdWJtaXNzaW9uIGNvbnRhaW5zIG1hdGVyaWFsIGZvciB3aGljaCB5b3UgZG8gbm90IGhvbGQgY29weXJpZ2h0LAp5b3UgcmVwcmVzZW50IHRoYXQgeW91IGhhdmUgb2J0YWluZWQgdGhlIHVucmVzdHJpY3RlZCBwZXJtaXNzaW9uIG9mIHRoZQpjb3B5cmlnaHQgb3duZXIgdG8gZ3JhbnQgRFNVIHRoZSByaWdodHMgcmVxdWlyZWQgYnkgdGhpcyBsaWNlbnNlLCBhbmQgdGhhdApzdWNoIHRoaXJkLXBhcnR5IG93bmVkIG1hdGVyaWFsIGlzIGNsZWFybHkgaWRlbnRpZmllZCBhbmQgYWNrbm93bGVkZ2VkCndpdGhpbiB0aGUgdGV4dCBvciBjb250ZW50IG9mIHRoZSBzdWJtaXNzaW9uLgoKSUYgVEhFIFNVQk1JU1NJT04gSVMgQkFTRUQgVVBPTiBXT1JLIFRIQVQgSEFTIEJFRU4gU1BPTlNPUkVEIE9SIFNVUFBPUlRFRApCWSBBTiBBR0VOQ1kgT1IgT1JHQU5JWkFUSU9OIE9USEVSIFRIQU4gRFNVLCBZT1UgUkVQUkVTRU5UIFRIQVQgWU9VIEhBVkUKRlVMRklMTEVEIEFOWSBSSUdIVCBPRiBSRVZJRVcgT1IgT1RIRVIgT0JMSUdBVElPTlMgUkVRVUlSRUQgQlkgU1VDSApDT05UUkFDVCBPUiBBR1JFRU1FTlQuCgpEU1Ugd2lsbCBjbGVhcmx5IGlkZW50aWZ5IHlvdXIgbmFtZShzKSBhcyB0aGUgYXV0aG9yKHMpIG9yIG93bmVyKHMpIG9mIHRoZQpzdWJtaXNzaW9uLCBhbmQgd2lsbCBub3QgbWFrZSBhbnkgYWx0ZXJhdGlvbiwgb3RoZXIgdGhhbiBhcyBhbGxvd2VkIGJ5IHRoaXMKbGljZW5zZSwgdG8geW91ciBzdWJtaXNzaW9uLgo=Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufjf.br/oai/requestopendoar:2023-11-15T06:03:50Repositório Institucional da UFJF - Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)false |
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