Isolamento, caracterização e avaliação da atividade de bacteriófagos líticos para biocontrole de Pseudomonas fluorescens em leite cru
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Data de Publicação: | 2020 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFJF |
Texto Completo: | https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/11815 |
Resumo: | O controle do crescimento de bactérias psicrotróficas no leite cru é crucial para a manutenção da sua qualidade e de seus derivados. Pseudomonas fluorescens destaca-se como principal contaminante, com capacidade de produzir enzimas hidrolíticas termoestáveis. Bacteriófagos, vírus que infectam exclusivamente bactérias, tem sido uma alternativa promissora de biocontrole em alimentos. Contudo, sua eficácia no controle da microbiota deteriorante de leite cru ainda é pouco estudada. Os objetivos desse estudo foram isolar e caracterizar bacteriófagos líticos e avaliar seu efeito sobre a contagem bacteriana, atividade proteolítica e proteólise causada por P. fluorescens. Foram utilizadas amostras de água de córregos, rio e efluente de laticínios e o método de enriquecimento para isolamento dos bacteriófagos contra P. fluorescens. Foram isolados dezoito bacteriófagos, dos quais sete foram selecionados para caracterização preliminar. A titulação desses bacteriófagos variou de 7 a 9 Log UFP/mL e o tamanho das placas de lise de 0,39 a 2,67 mm. Os isolados apresentaram capacidade de infecção restrita ao gênero Pseudomonas. Dois desses bacteriófagos (Ph6 e Ph32) foram caracterizados mais amplamente. Ph6 e Ph32 apresentaram tamanhos de genoma de 38,8 e 31,3 kbp; período de latência de 96 e 25 min; e burst size de 295 e 40 partículas virais por célula bacteriana infectada, respectivamente. Nenhum dos dois bacteriófagos foi termicamente inativado após 30 min de tratamento a 63 e 72 °C, e mantiveram suas titulações estáveis após exposição em faixas de pH de 5 – 11 por 60 min. Ambos os bacteriófagos foram inativados após tratamento com hipoclorito de sódio a 200 mg/L durante 30 min. Os bacteriófagos Ph6 e Ph32 reduziram a contagem de P. fluorescens em meio de cultivo à base de leite a 4 e 10 °C durante os 7 dias de armazenamento. Além disso, atrasaram em dois dias a atividade proteolítica e proteólise causada por P. fluorescens. No leite cru eles reduziram as contagens de Pseudomonas spp., psicrotróficos e aeróbios mesófilos em 3,2; 2,5 e 2,9 Log UFC/mL, respectivamente, após 7 dias de armazenamento a 4 °C. Os bacteriófagos do presente estudo possuem potencial para aplicação como agentes de controle biológico para preservação do leite cru refrigerado. |
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Os objetivos desse estudo foram isolar e caracterizar bacteriófagos líticos e avaliar seu efeito sobre a contagem bacteriana, atividade proteolítica e proteólise causada por P. fluorescens. Foram utilizadas amostras de água de córregos, rio e efluente de laticínios e o método de enriquecimento para isolamento dos bacteriófagos contra P. fluorescens. Foram isolados dezoito bacteriófagos, dos quais sete foram selecionados para caracterização preliminar. A titulação desses bacteriófagos variou de 7 a 9 Log UFP/mL e o tamanho das placas de lise de 0,39 a 2,67 mm. Os isolados apresentaram capacidade de infecção restrita ao gênero Pseudomonas. Dois desses bacteriófagos (Ph6 e Ph32) foram caracterizados mais amplamente. Ph6 e Ph32 apresentaram tamanhos de genoma de 38,8 e 31,3 kbp; período de latência de 96 e 25 min; e burst size de 295 e 40 partículas virais por célula bacteriana infectada, respectivamente. Nenhum dos dois bacteriófagos foi termicamente inativado após 30 min de tratamento a 63 e 72 °C, e mantiveram suas titulações estáveis após exposição em faixas de pH de 5 – 11 por 60 min. Ambos os bacteriófagos foram inativados após tratamento com hipoclorito de sódio a 200 mg/L durante 30 min. Os bacteriófagos Ph6 e Ph32 reduziram a contagem de P. fluorescens em meio de cultivo à base de leite a 4 e 10 °C durante os 7 dias de armazenamento. Além disso, atrasaram em dois dias a atividade proteolítica e proteólise causada por P. fluorescens. No leite cru eles reduziram as contagens de Pseudomonas spp., psicrotróficos e aeróbios mesófilos em 3,2; 2,5 e 2,9 Log UFC/mL, respectivamente, após 7 dias de armazenamento a 4 °C. Os bacteriófagos do presente estudo possuem potencial para aplicação como agentes de controle biológico para preservação do leite cru refrigerado.The control of psychrotrophic growth in raw milk is crucial for maintaining its quality and its derivatives. Pseudomonas fluorescens stands out as the main contaminant, capable of producing thermoestable hydrolytic enzymes. Bacteriophages, viruses that exclusively infect bacteria, have been a promising alternative for biocontrol in food. However, its effectiveness in controlling the raw milk microbiota is still poorly studied. The objectives of this study were to isolate and characterize lytic bacteriophages, as well as to evaluate its effect on the bacterial count, proteolytic activity and proteolysis caused by P. fluorescens. Samples of water from streams, rivers and dairy effluents were used, as well as the enrichment method for isolating bacteriophages against P. fluorescens. Eighteen bacteriophages were isolated, of which seven were selected for preliminary characterization. The titration of these bacteriophages varied from 7 to 9 Log PFU/mL and the size of the lysis plates was 0.39 and 2.67 mm. They also showed infection capacity restricted to genus Pseudomonas. Two of these bacteriophages (Ph6 and Ph32) were more widely characterized. Ph6 and Ph32 showed genome sizes of 38.8 and 31.3 kb; latency period of 96 and 25 min; and burst size of 295 and 40 viral particles per infected bacterial cell, respectively. Neither bacteriophage was thermally inactivated after 30 min of treatment at 63 and 72 ° C, and maintained their titrations stable after exposure in pH ranges of 5 - 11 for 60 min. Both bacteriophages were inactivated after treatment with sodium hypochlorite at 200 mg/L for 30 min. The bacteriophages Ph6 and Ph32 reduced the count of P. fluorescens in a milk-based culture medium at 4 and 10 ° C during the 7 days of storage. Also, they delayed proteolytic activity and proteolysis by two days. In raw milk, they decreased the counts of Pseudomonas spp., psychrotrophic and aerobic mesophiles by 3.2, 2.5 and 2.9 Log CFU/mL, respectively, after 7 days of storage at 4 °C. The bacteriophages of the present study have potential for application as biological control agents for preserving raw milk.porUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)Mestrado Profissional em Ciência e Tecnologia do Leite e Derivados (EPAMIG)UFJFBrasilFaculdade de FarmáciaAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessCNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIAPsicrotróficosProteóliseVírusPsychrotrophicProteolysisVirusIsolamento, caracterização e avaliação da atividade de bacteriófagos líticos para biocontrole de Pseudomonas fluorescens em leite cruinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFJFinstname:Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)instacron:UFJFORIGINALedilanecristinadonascimento.pdfedilanecristinadonascimento.pdfPDF/Aapplication/pdf1257102https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11815/1/edilanecristinadonascimento.pdf0147cf7776820048b28f06f480862069MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11815/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11815/3/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD53TEXTedilanecristinadonascimento.pdf.txtedilanecristinadonascimento.pdf.txtExtracted texttext/plain150415https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11815/4/edilanecristinadonascimento.pdf.txt6ff6e5d4d8a9e1ae1b54cdbfef790920MD54THUMBNAILedilanecristinadonascimento.pdf.jpgedilanecristinadonascimento.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1250https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11815/5/edilanecristinadonascimento.pdf.jpgddb15ea79f18f524878493db16950cd4MD55ufjf/118152020-11-06 04:07:20.633oai:hermes.cpd.ufjf.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufjf.br/oai/requestopendoar:2020-11-06T06:07:20Repositório Institucional da UFJF - Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)false |
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