Efeito de exossomos do tecido adiposo de camundongos obesos na polarização de macrófagos
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Data de Publicação: | 2021 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UFJF |
Texto Completo: | https://doi.org/10.34019/ufjf/di/2021/00460 https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/14223 |
Resumo: | O crescimento em escala mundial no número de casos de obesidade é alvo de preocupação, principalmente devido a essa condição ser fator de risco para o desenvolvimento de outras comorbidades decorrentes do processo inflamatório crônico no tecido adiposo. Este tecido é capaz de se comunicar através de hormônios, mediadores inflamatórios, e estudos recentes descrevem a importância de vesículas extracelulares nesse processo, com estas podendo de interagir inclusive com o sistema imune. Das células imunes, os macrófagos são as que estão presentes em maior número no tecido adiposo, já sendo relatado que no contexto da obesidade estas se encontram direcionadas ao perfil próinflamatório. Assim, o objetivo desse trabalho é avaliar como exossomos do tecido adiposo murino obeso interagem com macrófagos. Para isso animais C57BL/6 foram submetidos ao modelo de obesidade, o tecido adiposo perigonadal foi coletado para obtenção das vesículas, além da coleta da medula óssea do grupo controle para a diferenciação em macrófagos. Foi realizada a padronização da obtenção dos exossomos por centrifugação e ultracentrifugação, com o tamanho sendo avaliado pelo DLS e a quantidade de proteína pelo kit de BCA, com os dados encontrados até o momento sendo corroborados pelos encontrados na literatura. Foi estabelecida a concentração de trabalho dos exossomos (25 e 50 µg/mL) e realizada a padronização da obtenção de macrófagos derivados da medula óssea. A eficiência do método de diferenciação de macrófagos foi verificada através da análise da expressão de F4/80 por citometria de fluxo. Em seguida, as vesículas foram caracterizadas quanto ao tamanho, morfologia, presença de marcadores específicos e quantidade de proteínas. Macrófagos de cultura primária foram então tratados com os exossomos e avaliados quanto a mediadores produzidos e perfil de polarização. |
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Das células imunes, os macrófagos são as que estão presentes em maior número no tecido adiposo, já sendo relatado que no contexto da obesidade estas se encontram direcionadas ao perfil próinflamatório. Assim, o objetivo desse trabalho é avaliar como exossomos do tecido adiposo murino obeso interagem com macrófagos. Para isso animais C57BL/6 foram submetidos ao modelo de obesidade, o tecido adiposo perigonadal foi coletado para obtenção das vesículas, além da coleta da medula óssea do grupo controle para a diferenciação em macrófagos. Foi realizada a padronização da obtenção dos exossomos por centrifugação e ultracentrifugação, com o tamanho sendo avaliado pelo DLS e a quantidade de proteína pelo kit de BCA, com os dados encontrados até o momento sendo corroborados pelos encontrados na literatura. Foi estabelecida a concentração de trabalho dos exossomos (25 e 50 µg/mL) e realizada a padronização da obtenção de macrófagos derivados da medula óssea. A eficiência do método de diferenciação de macrófagos foi verificada através da análise da expressão de F4/80 por citometria de fluxo. Em seguida, as vesículas foram caracterizadas quanto ao tamanho, morfologia, presença de marcadores específicos e quantidade de proteínas. Macrófagos de cultura primária foram então tratados com os exossomos e avaliados quanto a mediadores produzidos e perfil de polarização.The worldwide growth in the number of obesity cases is a matter of concern, mainly because this condition is a risk factor for the development of other comorbidities resulting from the chronic inflammatory process in the adipose tissue. This tissue can communicate through hormones, inflammatory mediators, and recent studies describe the importance of extracellular vesicles in this process, with these being able to interact even with the immune system. Of the immune cells, macrophages are the ones that are present in greater numbers in the adipose tissue, and it has been reported that, in the context of obesity, they are directed towards a pro-inflammatory profile. Thus, the objective of this work is to evaluate how exosomes from obese murine adipose tissue interact with macrophages. For this, C57BL/6 animals were submitted to the obesity model, the adipose tissue gonadal fat was collected to obtain the vesicles, in addition to the collection of bone marrow from the control group for differentiation into macrophages. The standardization of the obtainment of exosomes by centrifugation and ultracentrifugation was carried out, with the size being evaluated by the DLS and the amount of protein by the BCA kit, with the data found so far being corroborated by those found in the literature. The working concentration of exosomes (25 and 50 µg/mL) was established and the standardization of obtaining bone marrow-derived macrophages was carried out. The efficiency of the macrophage differentiation method was verified by analyzing the expression of F4/80 by flow cytometry. Then, the vesicles were characterized in terms of size, morphology, presence of specific markers and amount of proteins. Primary culture macrophages were then treated with exosomes and evaluated for mediators produced and polarization profileporUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e BiotecnologiaUFJFBrasilICB – Instituto de Ciências Biológicashttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICASVesículas extracelularesExossomosTecido adiposoObesidadeMacrófagosExtracellular vesiclesExosomesAdipose tissueObesityMacrophagesEfeito de exossomos do tecido adiposo de camundongos obesos na polarização de macrófagosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFJFinstname:Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)instacron:UFJFCC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14223/1/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14223/2/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52ORIGINALleticialudmilladeoliveira.pdfleticialudmilladeoliveira.pdfapplication/pdf759734https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14223/3/leticialudmilladeoliveira.pdf1abfff2059f55f118a2e9f0a11e709faMD53TEXTleticialudmilladeoliveira.pdf.txtleticialudmilladeoliveira.pdf.txtExtracted texttext/plain152852https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14223/4/leticialudmilladeoliveira.pdf.txt717d423cab7cf618a4c8fb1dfdf7970eMD54THUMBNAILleticialudmilladeoliveira.pdf.jpgleticialudmilladeoliveira.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1244https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/14223/5/leticialudmilladeoliveira.pdf.jpg7ed840ce8ac2120bdf14d12f9536a238MD55ufjf/142232023-10-05 03:04:50.995oai:hermes.cpd.ufjf.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufjf.br/oai/requestopendoar:2023-10-05T06:04:50Repositório Institucional da UFJF - Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)false |
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