Revisão bibliográfica sobre proteínas inseticidas e indução de brotos em capim-elefante [Cenchrus purpureus syn Pennisetum purpureum (Schumach) Morrone], visando resistência à cigarrinha-das-pastagens

• Autor(a) principal: Sá, Thiago Andrei de
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFJF
• Texto Completo: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/15451
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOS; Capim-elefante; Cigarrinha-das-pastagens; Melhoramento genético; Transformação; Agrobacterium; Elephant grass; Spittlebug; Genetic transformation; Genetic enhancement

O capim-elefante é uma gramínea de alto desempenho, muito utilizada no pastejo rotativo com enfoque na alimentação pecuária. Com diversas cultivares, uma que chama a atenção é a BRS Capiaçu, que apresenta aumento na produção de matéria verde, resistência a estresse hídrico e à seca, mas não a insetos-praga. Dentre os insetos-praga que assolam as plantações de capim-elefante, pode-se destacar as cigarrinhas-das-pastagens, um agrupamento que reúne diversas espécies de hemípteros. Esses animais se alimentam da seiva da forrageira e liberam secreções salivares que impactam diretamente na produção de matéria verde, causando a queda na produção de clorofila. A partir disso, é importante que se desenvolva um capim-elefante capaz de resistir ao ataque desses insetos. Portanto, este trabalho teve como objetivo o levantamento de possíveis proteínas inseticidas para o capim e o desenvolvimento de um protocolo de indução de brotos de capim-elefante in vitro para transformação genética. Para tal, foram trazidas amostras de capim-elefante para a retirada dos meristemas laterais destes com intuito de induzi-los a gerar brotos. Antes da retirada dos meristemas, as estacas foram cortadas nos entrenós e lavadas com água corrente e detergente, depois banhadas em álcool 70% por dois minutos e então transferidas para solução de hipoclorito de sódio 2%. Por fim, foram lavadas em água com PPM 0,1% para a remoção dos meristemas. Assim, prepararam-se meios de cultura Murashige-Skoog (MS) com concentrações diferentes de BAP, TDZ e 2,4-D para analisar o desenvolvimento dos meristemas em diferentes concentrações. Os resultados indicaram que o melhor meio de cultura é aquele com 0,1 mg.L-1 de 2,4-D e 0,5 mg.L-1 de BAP (MIB2). Para a curva de seleção, foram testadas diferentes concentrações de canamicina até 150 mg.L-1, mas as análises estatísticas apontaram a concentração de 50 mg.L-1 como a melhor. Dessa forma, para testar as chances de transformação, o trabalho prosseguiu com a co-cultura dos meristemas de capim com a Agrobacterium, a qual continha o gene GFP para fluorescência. As bactérias cresceram por dois dias em meio Luria Bertani (LB) e a amostra obteve 0,828 de absorbância. Os meristemas foram cortados ao meio e deixados em contato com a Agrobacterium por 40 minutos. Posteriormente, foram lavados em água com 0,1% de PPM e então inoculados em meio MIB2 sem canamicina. Três dias depois, esses meristemas foram transferidos para meio MIB2 com 50 mg.L-1 de canamicina e foram trocados de placas sempre que havia indícios de contaminação. Uma semana depois, as amostras foram observadas ao microscópio invertido e foram constatados indícios de transformação em 14 dos 45 meristemas induzidos.