Silenciamento de metaloproteinases de matriz 9 e 13 por RNA de interferência em modelo de câncer de mama murino

• Autor(a) principal: Gualberto, Ana Cristina Moura
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFJF
• Texto Completo: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/14552
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA; Câncer de mama; Metástase; Metaloproteinase de matriz; Nanopartículas; siRNA; Breast cancer; Metastasis; Matrix metalloproteinase; Nanoparticles; siRNA

O câncer engloba um conjunto de doenças caracterizadas por crescimento e invasão celular anormal em órgãos e tecidos podendo espalhar-se para outros locais do corpo. Atualmente é considerado um problema de saúde pública mundial com altos índices de mortalidade. O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais prevalente em mulheres com altos índices de mortalidade devido a metástases. Proteínas envolvidas no processo de progressão tumoral tem sido alvos de abordagens terapêuticas. Nesse contexto, as metaloproteinases de matriz (MMPs) são genes que se encontram superexpressos em diversos tipos de cânceres e atuam na progressão tumoral por meio da proteólise de componentes da membrana basal e matriz extracelular, atuando na invasão e metástase de células tumorais. Terapias atuais como hormonal, quimioterapia, radioterapia e imunoterapia não tem sido totalmente eficaz, tornando-se necessário a busca de novas abordagens terapêuticas. Nesse contexto, o silenciamento de genes superexpressos nos tumores é uma alternativa. O uso de RNAs de interferência (siRNA) tem sido descrito como potencial método para o silenciamento, porém as moléculas de siRNA livres oferecem algumas limitações, como dificuldade para entrar de forma passiva nas células e seu peso molecular, sendo necessária o uso de nanocarreadores que entreguem esta molécula à célula alvo. Diante disso, o objetivo principal foi utilizar nanopartículas híbridas de fosfato de cálcio para a entrega de siRNA in vitro às células de câncer de mama metastático 4T1 para silenciar os genes de MMPs 9 e 13. Os resultados obtidos mostraram que as sequências de siRNA construídas a partir de critérios de funcionalidade foram adequadas para a utilização proposta. Além disso, as nanopartículas híbridas utilizadas apresentam tamanho adequado para a entrega de siRNA às células tumorais alvo e eficiência de incorporação de siRNA às nanopartículas de aproximadamente 80%. Foi avaliada a capacidade citotóxica (ensaios de MTT e Azul de Tripan) das nanopartículas e de siRNas em células 4T1 e não houve diferença significativa na viabilidade celular. Em seguida, avaliamos se a complexo nanoestruturado foi eficaz reduzindo a expressão dos genes alvo. Obtivemos um silenciamento satisfatório que permitiu analisar se, ao silenciar MMP9 e MMP13, haveria interferência em etapas fundamentais de progressão tumoral como proliferação (ensaio clonogênico) e migração celulares (ensaio de wound healing e transwell). Os resultados obtidos corroboraram aos dados da literatura que mostram MMP9 e MMP13 envolvidas com o processo de migração de células tumorais em câncer de mama. Portanto, não obtivemos diferenças em termos de proliferação celular com o silenciamento das MMPs 9 e 13, mas houve redução significativa nos processos de migração de células tumorais com o silenciamento. Em conclusão, as MMPs 9 e 13 estão envolvidas com a migração de células de câncer de mama e o silenciamento por RNAi se mostrou promissor para novas abordagens terapêuticas e para a melhor compreensão sobre as metástases em câncer de mama.