Identificação de genes diferencialmente expressos associados ao declínio dos citros (Citrus spp)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Abreu, José Renato de
Data de Publicação: 2007
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFLA
Texto Completo: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/1970
Resumo: Agroquímica e Agrobioquímica
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spelling Identificação de genes diferencialmente expressos associados ao declínio dos citros (Citrus spp)Identification of differently expressed genes associated with Citrus Blight (Citrus Spp.)CitrosExpressão gênicaHibridação subtrativaCitrusExpressed geneSubtractive HybridizationCNPQ_NÃO_INFORMADOAgroquímica e AgrobioquímicaO Brasil é o maior produtor de citros do mundo, sendo responsável por mais de 20% da produção mundial. No entanto, a produção ainda é baixa devido a muitos problemas fitossanitários, a exemplo do Declínio dos Citros. O Declínio dos Citros é uma anomalia cuja causa ainda não foi determinada. As árvores que começam a declinar não se recuperam, chegam a um estágio de declínio crônico, mas raramente morrem. Embora o Declínio dos Citros tenha sido descrito há mais de 100 anos, sua etiologia ainda é desconhecida. Consequentemente, não existem medidas de controle para minimizar as perdas na produção, fato esse que piora, considerando que os sintomas só são detectados após 3 anos, quando as plantas entram em produção. O uso de variedades resistentes é considerada a medida de controle mais adequada. Contudo, pouco se conhece sobre os genes envolvidos na resposta de defesa das plantas a essa anomalia. Considerando que muitas alterações fisiológicas associadas com respostas a estresses em plantas são controladas ao nível transcripcional, neste estudo objetivou-se a identificação e caracterização de produtos de expressão gênica expressos diferencialmente na resposta ao Declínio dos Citros. Para isso, foi utilizada a técnica de biblioteca subtrativa supressiva (Supression Subtractive Hybridization) utilizando de mRNAs isolados de raízes de limoeiro "Cravo" (Citrus limonia L. Osbeck) sob laranja "Pera" (Citrus sinensis L. Osbeck) com e sem o Declínio. A identificação da possível função dos genes/ESTs isolados foi realizada por comparação de seqüência com outros genes descritos em bancos de dados de genes. Adicionalmente, a presença da anomalia Declínio foi confirmada mediante análise eletroforética do perfil protéico em gel "SDS-PAGE" (Sodium Dodecyl Sulfate polyacrylamide Gel Eletrophoresis) das proteínas de raíz de limão "Cravo" (Citrus limonia Osbeck). Foram construídas duas bibliotecas subtrativas de cDNAs, uma enriquecida com cDNA diferencialmente de árvores com alto grau do Declínio (forward) e outra enriquecida com genes expressos em plantas amostradas como sadias (reverse). Foram obtidos 129 clones de genes diferencialmente expressos, dos quais 38 representam a biblioteca forward e 91, a biblioteca reverse. Após análise, constatou-se que 45% dos clones da biblioteca subtrativa supressiva vindas de mRNA isolados de árvores com alto grau do Declínio estavam associados a proteínas de senescência, enquanto somente 20% desses clones foram identificados na biblioteca subtrativa supressiva vindas de mRNA isolados de plantas sadias. Outros genes foram isolados, apresentando funções similares relacionadas a proteínas, como: LEA do tipo dehidrina, citocromo P450 tipo TBP, provável germina, proteína do tipo metalotioneína, hidrolase, ubiquitina, proteína 14-3-3, que têm a função de responder a uma gama de estímulos e/ou fatores ambientais bióticos ou abióticos e principalmente o de estresse hídrico, também aquelas com funções hipotéticas e as que não tiveram nenhuma similaridade com proteínas depositadas em banco de dados. Pelos resultados obtidos, infere-se que todas as plantas coletadas em Bebedouro, SP, inclusive aquelas coletadas como sadias, estavam com Declínio dos Citros, porém, em estágios diferentes da anomalia.Brazil is the world´s greatest citrus grower, its being responsible for over 20% of the world´s production. Nevertheless, the production is still poor due to a great deal of phytosanitary problems, for instance Citrus Blight. Citrus Blight is a anomaly the cause of which has been not determined yet. The tree which begin to decliner, do not recover, they reach a chronic Blight stage, but they hardly die. Although, Citrus Blight has been reported for more than 100 years, its etiology is still unknown. Consequently, there are no control measures to minimize the losses in production, a fact that worsens markedly considering that the symptoms only are detected after three years´ period, when the plants begin to yield. Use of resistant varieties is regarded as a more adequate control measure. However, little is known about the genes involved in the defense response of the plants to this anomaly. Taken into account that a great deal of physiological alterations associated with stress responses in plants are controlled at the transcriptional level, in this study, the identification and characterization of the products of the gene expression expressed differently in the response to Citrus Blight was intended. So, the Suppression Subtractive Hybridization technique by utilizing mRNAs isolated from lemon tree "Cravo" (Citrus limonia L. Osbeck) under orange "Pera" (Citrus sinensis L. Osbeck) both with and without Declinio was utilized. The identification of the possible function of genes/ESTs isolated was performed by sequence comparison with other genes reported in gene databanks. In addition, the presence of declinio anomaly was confirmed by means of protein profile electrophoretic analysis on SDS-PAGE gel. (Sodium Dodecyl Sulfate polyacrylamide Gel Electrophoresis) of the"Cravo" lemon root proteins (Citrus limonia Osbeck). Two cDNAs subtractive libraries were built, one enriched with cDNA differentially from trees with a high degree of Blight (forward) and another enriched with genes expressed in plants sampled as healthy (reverse). 129 clones of differently expressed genes were obtained, 38 genes standing from the forward library and 91 clones the reverse library. After analysis, it was found that 45% 6of the clones of the suppression subtractive library coming from mRNAS isolated from tree with a high degree of Blight were associated with the senescence proteins, while only 20% of these clones were identified in the suppression subtractive library coming from mRNA isolated from healthy plants. Other genes were isolated, presenting similar functions related with proteins such as LEA dehydrin-like, cytochrome P450 like_TBP, putative germin, metallothionein-like protein, hydrolase, ubiquitin, protein 14-3-3 which have function of responding to a range of stimuli and/or biotic or abiotic environmental factors and mainly the one water stress, also those with hypothetical functions and the ones which had no similarity with proteins deposited in databank. The results obtained suggest that all the plants collected in Bebedouro - SP, including those collected as healthy were with Blight, but at stages different from anomaly.UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRASDQI - Programa de Pós-graduaçãoUFLABRASILPaiva, Luciano VilelaSantos, Custódio Donizete dosChalfun Junior, AntonioRodriguez, Miguel Dita AngelAbreu, José Renato de2014-08-01T18:52:15Z2014-08-01T18:52:15Z2014-08-012007-02-28info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfABREU, J. R. de. Identificação de genes diferencialmente expressos associados ao declínio dos citros (Citrus spp.). 2007. ix, 71 p. Dissertação (Mestrado em Agroquímica) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2007.http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/1970info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFLAinstname:Universidade Federal de Lavras (UFLA)instacron:UFLA2014-08-01T18:52:15Zoai:localhost:1/1970Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ufla.br/oai/requestnivaldo@ufla.br || repositorio.biblioteca@ufla.bropendoar:2014-08-01T18:52:15Repositório Institucional da UFLA - Universidade Federal de Lavras (UFLA)false
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