Seleção e caracterização molecular de cepas de Bacillus thuringiensis para controle do pulgão-verde-dos-cereais (Schizaphis graminum)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Moreira, Raquel Oliveira
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFLA
Texto Completo: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/29904
Resumo: Greenbug is a sap-sucking insect that infects crops causing damages not only as a direct result of feeding but also by their importance as vectors of plant viruses.S. graminumis considered a secondary pest of maize, but with an intensification of the pest management, especially for Lepidoptera order, it has been observed a recurrent infestation due to the reduced use of the broad-spectrum pesticides and the lack of intraspecific competition. So, the present work aimed to evaluate the molecular genetic profile of Bacillus thuringiensis (Bt) strains and its entomopathogenic potential for S. graminum.Bioassays against S. graminum were carried out using four elite strains entomopathogenic for pests of different orders and belonging to the collection of Microorganisms of Embrapa Maize and Sorghum. Furthermore, the expression of cry genes and protein profile analysis were also conducted for each strain.Strains 1644 and 1648 showed a higher and faster pathogenic effect, reducing insect survival rates to 20% after 48h and to 6% and 0%after 96h of exposure, respectively. The strains 1636 and 1641 were also entomopathogenic, but survival rates diminish more slowly. No expression of cry genes evaluated could be detected in 1644 and 1648 strains whereas the cry2Ab gene showed an expression profile characteristic of the sporulation-dependent cry genes. Total protein analysis from 1636, 1641 and 1644 strains showed different protein profiles with molecular weights ranging from 20 to 210 kDa. We could not associate proteins from 1644 and 1648 with Cry proteins. However, in the profile showed by 1636 strain, two bands with 60 and 130 kDa are similar to the Cry2A (70 kDa) and Cry1Ac (120 kDa) proteins, respectively. The results demonstrate the potential of these strains as a source of genes against S. graminum, besides evidencing the need to better understand the regulation of the cry genes in these isolates and to optimize the processes for obtaining products based onB. thuringiensis.
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So, the present work aimed to evaluate the molecular genetic profile of Bacillus thuringiensis (Bt) strains and its entomopathogenic potential for S. graminum.Bioassays against S. graminum were carried out using four elite strains entomopathogenic for pests of different orders and belonging to the collection of Microorganisms of Embrapa Maize and Sorghum. Furthermore, the expression of cry genes and protein profile analysis were also conducted for each strain.Strains 1644 and 1648 showed a higher and faster pathogenic effect, reducing insect survival rates to 20% after 48h and to 6% and 0%after 96h of exposure, respectively. The strains 1636 and 1641 were also entomopathogenic, but survival rates diminish more slowly. No expression of cry genes evaluated could be detected in 1644 and 1648 strains whereas the cry2Ab gene showed an expression profile characteristic of the sporulation-dependent cry genes. Total protein analysis from 1636, 1641 and 1644 strains showed different protein profiles with molecular weights ranging from 20 to 210 kDa. We could not associate proteins from 1644 and 1648 with Cry proteins. However, in the profile showed by 1636 strain, two bands with 60 and 130 kDa are similar to the Cry2A (70 kDa) and Cry1Ac (120 kDa) proteins, respectively. The results demonstrate the potential of these strains as a source of genes against S. graminum, besides evidencing the need to better understand the regulation of the cry genes in these isolates and to optimize the processes for obtaining products based onB. thuringiensis.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Pulgões-verde-dos-cereais (Schizaphis graminum) são insetos sugadores de seiva do floema que infectam as culturas, causando danos não só pelo resultado direto da alimentação mas também pela sua importância nos vetores dos vírus das plantas. S. graminum é considerado uma praga secundária de milho, mas com a intensificação do manejo de pragas, especialmente para a ordem de Lepidoptera, tem sido observada uma infestação recorrente devido à redução do uso de pesticidas de amplo espectro e à falta de competição intraespecífica. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil genético e molecular de linhagens de Bacillus thuringiensis (Bt) e seu potencial entomopatogênico para S. graminum. Bioensaios contra S. graminum foram realizados utilizando quatro linhagens elite entomopatogênicas para pragas de diferentes ordens e pertencentes à coleção de Microrganismos da Embrapa Milho e Sorgo. Além disso, a expressão dos genes cry e a análise do perfil de proteínas também foram realizadas para cada cepa. As linhagens 1644 e 1648 mostraram um efeito patogênico maior e mais rápido, reduzindo as taxas de sobrevivência de insetos a 20% após 48 horas e a 6% e 0% após 96 horas de exposição, respectivamente. As cepas 1636 e 1641 também foram entomopatogênicas, mas as taxas de sobrevida diminuíram mais lentamente. Nenhuma expressão de genes cry foi detectada nas cepas 1644 e 1648, enquanto o gene cry2Ab apresentou um perfil de expressão característico dos genes cry dependentes de esporulação. A análise de proteína total das linhagens 1636, 1641 e 1644 mostrou diferentes perfis protéicos com pesos moleculares variando de 20 a 210 kDa. Não pudemos associar as proteínas de 1644 e 1648 com proteínas Cry. No entanto, no perfil mostrado pela estirpe 1636, duas bandas com 60 e 130 kDa são semelhantes às proteínas Cry2A (70 kDa) e Cry1Ac (120 kDa), respectivamente. Os resultados demonstram o potencial dessas linhagens como fonte de genes contra S. graminum, além de evidenciar a necessidade de melhor entender a regulação dos genes cry nestes isolados e otimizar os processos de obtenção de produtos à base de B. thuringiensis.Universidade Federal de LavrasPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia VegetalUFLAbrasilNão especifica vinculação com nenhum departamentoValicente, Fernando HercosBarros, Beatriz de AlmeidaValicente, Fernando HercosBarros, Beatriz de AlmeidaLana, Ubiraci Gomes de PaulaMoreira, Raquel Oliveira2018-08-07T16:26:05Z2018-08-07T16:26:05Z2018-08-072018-05-07info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfMOREIRA, R. O. Seleção e caracterização molecular de cepas de Bacillus thuringiensis para controle do pulgão-verde-dos-cereais (Schizaphis graminum). 2018. 64 p. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia Vegetal)–Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2018.http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/29904porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFLAinstname:Universidade Federal de Lavras (UFLA)instacron:UFLA2023-04-12T14:11:54Zoai:localhost:1/29904Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ufla.br/oai/requestnivaldo@ufla.br || repositorio.biblioteca@ufla.bropendoar:2023-04-12T14:11:54Repositório Institucional da UFLA - Universidade Federal de Lavras (UFLA)false
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description Greenbug is a sap-sucking insect that infects crops causing damages not only as a direct result of feeding but also by their importance as vectors of plant viruses.S. graminumis considered a secondary pest of maize, but with an intensification of the pest management, especially for Lepidoptera order, it has been observed a recurrent infestation due to the reduced use of the broad-spectrum pesticides and the lack of intraspecific competition. So, the present work aimed to evaluate the molecular genetic profile of Bacillus thuringiensis (Bt) strains and its entomopathogenic potential for S. graminum.Bioassays against S. graminum were carried out using four elite strains entomopathogenic for pests of different orders and belonging to the collection of Microorganisms of Embrapa Maize and Sorghum. Furthermore, the expression of cry genes and protein profile analysis were also conducted for each strain.Strains 1644 and 1648 showed a higher and faster pathogenic effect, reducing insect survival rates to 20% after 48h and to 6% and 0%after 96h of exposure, respectively. The strains 1636 and 1641 were also entomopathogenic, but survival rates diminish more slowly. No expression of cry genes evaluated could be detected in 1644 and 1648 strains whereas the cry2Ab gene showed an expression profile characteristic of the sporulation-dependent cry genes. Total protein analysis from 1636, 1641 and 1644 strains showed different protein profiles with molecular weights ranging from 20 to 210 kDa. We could not associate proteins from 1644 and 1648 with Cry proteins. However, in the profile showed by 1636 strain, two bands with 60 and 130 kDa are similar to the Cry2A (70 kDa) and Cry1Ac (120 kDa) proteins, respectively. The results demonstrate the potential of these strains as a source of genes against S. graminum, besides evidencing the need to better understand the regulation of the cry genes in these isolates and to optimize the processes for obtaining products based onB. thuringiensis.
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