Criopreservação e vitrificação de sêmen de curimba (Prochilodus lineatus): uso de diferentes crioprotetores na solução diluidora

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vasconcelos, Ana Carina Nogueira
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFLA
Texto Completo: http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/1910
Resumo: Dissertação apresentada à Universidade Federal de Lavras, como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, área de concentração em Ciências Veterinárias, para a obtenção do título de Mestre.
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Alíquotas de 400 µL de sêmen, de 19 reprodutores, foram diluídas em quatro soluções crioprotetoras (DMSO+gema de ovo, DMSO+lactose, metanol+gema de ovo e metanol+lactose) e envasadas em palhetes de 0,5 ml. As amostras foram colocadas durante 24 horas em vapor de nitrogênio líquido e após esse período, foram imersas nesse fluido criogênico por 10 dias. Após o descongelamento, a maior taxa e duração de motilidade foram obtidas utilizando a lactose como crioprotetor extracelular, independente da sua combinação (p<0,05). Não houve diferença significativa entre os tratamentos quando se analisou a morfologia espermática após o descongelamento (p>0,05). Considerando os efeitos dos tratamentos testados, recomenda-se o uso da lactose, como crioprotetor extracelular, acrescida de DMSO ou metanol, visto que essas combinações apresentaram as maiores taxas e durações de motilidade e baixo índice de alterações morfológicas após o descongelamento. Com o segundo experimento objetivou-se desenvolver um protocolo simplificado para a vitrificação de sêmen de curimba utilizando diferentes concentrações de metanol (10 e 20%). A toxicidade aguda desse crioprotetor interno foi testada e comparou-se à vitrificação com e sem metanol na solução diluidora. Alíquotas de 20 µL de sêmen, de 23 reprodutores, foram colocadas em palhetas de 0,25 ml e imersas diretamente em nitrogênio líquido. Após o descongelamento das amostras, mensurou-se a motilidade espermática e as alterações morfológicas nos espermatozoides. A diluição do sêmen em soluções crioprotetoras reduziu significativamente a motilidade espermática (p<0,0001). Quando comparadas à solução contendo apenas o diluidor Belltsville Thawing Solution (BTS), a presença do metanol no meio reduziu a taxa e a duração da motilidade espermática. Após o descongelamento, não houve motilidade em nenhum dos tratamentos e a análise morfológica mostrou uma alta incidência de cauda enrolada nas amostras que foram vitrificadas na presença do metanol. Esses dados demonstram a necessidade de melhoria da técnica para essa espécie e mostram que a morfologia espermática não é suficiente para avaliar os danos causados durante o processo de vitrificação.The first experiment aimed at comparing the toxicity and the effect of the combination of intra and extracellular cryoprotectants, in sperm cells of curimba (Prochilodus lineatus) subjected to cryopreservation. Aliquots of 400 µl of semen from 19 males were diluted in four cryoprotectant solutions (DMSO+egg yolk, lactose+DMSO, methanol+egg yolk and lactose+methanol) and placed in 0.50 ml sterile straws. The samples were placed for 24 hours in liquid nitrogen vapor and, later, immersed in the cryogenic fluid for 10 days. After thawing, the highest motility rate and duration was obtained by using lactose as extracellular cryoprotectant, independent of its combination (p<0.05). There was no significant difference between treatments when analyzing sperm morphology after thawing (p>0.05). Considering the effects of the tested treatments, we recommend the use of lactose as extracellular cryoprotectant, added with DMSO or methanol, since these combinations presented the highest motility rates and durations as well as low morphological change rate after thawing. The second experiment aimed at developing a simplified protocol for curimba semen vitrification using different methanol concentrations (10 and 20%). The acute toxicity of this internal cryoprotectant was tested and we compared vitrifications with and without methanol in the diluting solution. Aliquots of 20 µl of semen from 23 males were placed in 0.25 ml sterile straws and directly immersed into liquid nitrogen. After thawing, we measured sperm motility and morphological changes in spermatozoa. The dilution of the semen in cryoprotectant solutions significantly reduced sperm motility (p<0.0001). When compared to the solution containing only Belltsville Thawing Solution (BTS), the presence of methanol in the medium reduced sperm motility rate and duration. After thawing, there was no motility in any of the treatments and the morphological analysis showed a high incidence of curled tail in the samples which were vitrified in the presence of methanol. These data demonstrate the need to improve the technique for this species and show that sperm morphology is not sufficient to assess the damage caused during the vitrification process.UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRASDMV - Programa de Pós-graduaçãoUFLABRASILMurgas, Luís David SolisMian, Gláucia FrasnelliFelizardo, Viviane de OliveiraVictorio, Sheila Cristina da SilvaVasconcelos, Ana Carina Nogueira2014-07-31T18:54:45Z2014-07-31T18:54:45Z201420142014-02-20info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfVASCONCELOS, A. C. N. Criopreservação e vitrificação de sêmen de curimba (Prochilodus lineatus): uso de diferentes crioprotetores na solução diluidora. 2014. 73 p. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2014.http://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/1910info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFLAinstname:Universidade Federal de Lavras (UFLA)instacron:UFLA2014-09-23T12:24:29Zoai:localhost:1/1910Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ufla.br/oai/requestnivaldo@ufla.br || repositorio.biblioteca@ufla.bropendoar:2014-09-23T12:24:29Repositório Institucional da UFLA - Universidade Federal de Lavras (UFLA)false
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