Real-time PCR for detection of Brucella ovis and Histophilus somni in ovine urine and semen

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Moustacas,V.S.
Data de Publicação: 2015
Outros Autores: Silva,T.M.A., Costa,É.A., Costa,L.F., Paixão,T.A., Santos,R.L.
Tipo de documento: Artigo
Idioma: eng
Título da fonte: Arquivo brasileiro de medicina veterinária e zootecnia (Online)
Texto Completo: http://old.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0102-09352015000601751
Resumo: RESUMO A epididimite infecciosa ovina é uma das principais enfermidades reprodutivas de carneiros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver protocolos de PCR em tempo real para B. ovis e H. somni e avaliar sua aplicabilidade em amostras de sêmen e urina de carneiros. Delinearam-se primers e sondas espécie-específicos para cada agente. As sondas foram delineadas com o sistema TaqMan incorporando um marcador FAM para B. ovis e Cy5 para H. somni na extremidade 5' e um quencher na extremidade 3'. A PCR em tempo real para B. ovis e H. somni foi altamente sensível, uma vez que a amplificação de DNA ocorreu com até 0,2ng de DNA/reação. A especificidade dos iniciadores e sondas foi avaliada com amostras de DNA de outros agentes causadores de epididimite ovina e nenhuma amplificação inespecífica foi observada. A aplicabilidade da técnica em amostras biológicas também foi confirmada, pois não houve perda de eficácia (P>0,05) quando comparada à PCR convencional com amostras de sêmen e urina de carneiros experimentalmente infectados.
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