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Carlos Renato Machadohttp://lattes.cnpq.br/6306925202374274http://lattes.cnpq.br/8695433756303749Bruno Marçal Repolês2020-03-04T19:27:17Z2020-03-04T19:27:17Z2019-09-27http://hdl.handle.net/1843/32690Trypanosoma cruzi é um membro da ordem Kinetoplastida e, como tal, possui uma mitocôndria única e modificada, chamada de cinetoplasto. O cinetoplasto possui diversas características únicas em comparação com a mitocôndria de outros eucariotos. Apesar de diversas proteínas de sistemas de reparo de DNA já terem sido descritas como presentes na mitocôndria destes parasitos, não existem muitas informações sobre as vias de reparo que estão envolvidas na manutenção do DNA do cinetoplasto (kDNA). Neste trabalho investigamos possíveis vias de reparo de DNA que podem estar envolvidas com o metabolismo do kDNA de T. cruzi. Estudamos o fenótipo de uma cepa superexpressora da proteína do reparo por excisão de bases TcMYH. Foi visto, por PCR quantitativa, que este superexpressor possui mais danos no kDNA no primeiro momento, em comparação com a cepa selvagem. Foi visto também, utilizando um reagente desenhado para causar danos especificamente no DNA mitocondrial, que este mutante é mais sensível que a célula selvagem e que esta superexpressão gera mais sítios AP no DNA total do parasito. Estes resultados sugerem que o parasita é capaz de lidar com dano oxidativo em seu kDNA. Uma das características únicas do cinetoplasto é a presença de proteínas específicas chamadas de proteínas associadas ao cinetoplasto (KAP). Apesar de alguns trabalhos descreverem a localização destas proteínas nos sítios antipodais, regiões na qual vários processos do metabolismo do kDNA ocorrem, suas funções não são claras ainda. Neste trabalho também estudamos a função da proteína TcKAP7, que possui homologia com o fator de transcrição mitocondrial A (TFAM). Nossos resultados demonstraram que a falta de TcKAP7 está relacionada com a sensibilidade à radiação UV e cisplatina, além de resistência a altos níveis de estresse oxidativo no parasita. Este mesmo fenótipo de sensibilidade foi observado em heminocautes de um homólogo de TcKAP7 em outro tripanossomatídeo, o parasita de insetos Angomonas deanei. Nossos resultados demonstram que TcKAP7 está envolvida na resposta ao dano de DNA mitocondrial. Além de investigar os mecanismos de reparo do kDNA, neste trabalho também investigamos a troca de material genético em diferentes cepas de T. cruzi. Nossos resultados demonstram que T. cruzi é capaz de realizar troca de material genético dentro de uma população e que, as diversas cepas distintas, são capazes de trocar material genético entre elas. Esta troca também parece estar diretamente ligada ao nível de TcRad51 nestas cepas. Estes resultados mostram que este parasita é capaz de trocar material genético e que a recombinação homóloga pode ter papel fundamental neste processo.Trypanosoma cruzi is a member of the Kinetoplastida and as so, present a single and unique mitochondria, called kinetoplast, which possesses several distinct features in comparison with other eukaryotes mitochondria. Although several proteins of the DNA repair systems have already being described as present on the parasite mitochondria, there’s not much information about the DNA repair pathways involved on the kinetoplast DNA (kDNA) maintenance. In this work we investigate possible DNA repair pathways that could be involved on T. cruzi kDNA metabolism. To first investigate the repair proteins related to the kDNA metabolism we analyzed the effect of overexpressing the protein TcMYH, which is involved in base excision DNA repair in T. cruzi. As shown by qPCR, the overexpressor strain of TcMYH has more damages on the kDNA at the first moment, when compared to the wild type strain. Also, when we used a reagent designed to specifically cause damage on the mitochondrial DNA, we could observe that this mutant is more sensitive than the WT control strain, and that the overexpression of the protein generates more AP sites on the parasite organelle. These results suggest that the parasite is able to deal with oxidative damage that attacks the kDNA. One of the unique features of the kinetoplast is the presence of specific proteins called kinetoplast associated proteins (KAP). Although some works described the location of those proteins on the antipodal sites, regions of DNA metabolism on the kinetoplast, their function are not yet clear. In this work we study the function of the proteinTcKAP7, which has sequence homology with the Mitochondrial transcription factor A (TFAM). Our results demonstrate that the absence of TcKAP7 is related to a long-term sensitivity to UV radiation and cisplatin; and a resistance to high levels oxidative stress on the parasite. The same phenotype has been observed for Angomonas deanei mutants, another trypanossomatid and an insect parasite. In this work we also investigate the genetic exchange events in different T. cruzi strains. Our results demonstrate that T. cruzi is able to perform genetic exchange among individuals in a same population. Also, the variety of T. cruzi strains are able to perform genetic exchange among them. This exchange is also linked to the levels of TcRad51 on these strains. Together, these results demonstrate that this parasite is able to perform genetic exchange and that the homologous recombination could be linked to this process.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas GeraisCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e ImunologiaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIAhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessGenéticaTrypanosoma cruziReparo de DNARecombinação homólogaRadiação ionizanteQuebras de DNA de Cadeia DuplaTrypanosoma cruzireparo de DNAcinetoplastomitocôndriaKap7HíbridosMutYMYHRad51DTU'sMetabolismo de DNA em Trypanosoma cruzi: vias de reparo mitocondrial e formação de híbridosDNA metabolism in Trypanosoma cruzi: mitochondrial repair pathways and hybrid formationinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGCC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/32690/2/license_rdfcfd6801dba008cb6adbd9838b81582abMD52ORIGINALTese Final Bruno Repoles.pdfTese Final Bruno Repoles.pdfapplication/pdf8337600https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/32690/1/Tese%20Final%20Bruno%20Repoles.pdf3bdf339b1e4fbae650cd0ba18cdb36b1MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82119https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/32690/3/license.txt34badce4be7e31e3adb4575ae96af679MD53TEXTTese Final Bruno Repoles.pdf.txtTese Final Bruno Repoles.pdf.txtExtracted texttext/plain385266https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/32690/4/Tese%20Final%20Bruno%20Repoles.pdf.txt3e6a9f57722063245ccb5ad079f5855dMD541843/326902020-03-05 03:37:47.981oai:repositorio.ufmg.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2020-03-05T06:37:47Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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