Avaliação de características espermáticas após desafio laboratorial que mimetiza condições uterinas e sua relação com resultados de fertilidade em campo
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFMG |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1843/43832 https://orcid.org/ 0000-0002-8326-2748 |
Resumo: | O presente estudo teve por objetivo avaliar diferenças na resistência in vitro de amostras de sêmen bovino descongelado, depois de serem submetidas a um desafio laboratorial que mime-tiza condições do trato reprodutor das vacas, a fim de comparar as características seminais in vitro com a fertilidade in vivo dos diferentes touros avaliados. Foram utilizadas doses de sêmen de 6 touros, sendo avaliada uma partida de cada touro e três repetições por partida (n = 18). Para cada partida de sêmen, o seguinte procedimento foi realizado: inicialmente, a dose de sê-men (500 μL) foi descongelada à 37ºC por 30 seg (Grupo Controle) e foram avaliados: motili-dade, vigor, concentração, morfologia espermática, funcionalidade da membrana plasmática (teste hiposmótico; HOST), análise computadorizada da cinética espermática (CASA) e análise da integridade de cromatina e morfometria espermática pelo teste de azul de toluidina. Em se-guida, uma alíquota de 200 μL da amostra descongelada foi submetida ao teste de resistência seminal in vitro aqui proposto (chamado de desafio laboratorial). A alíquota de 200 μL foi depositada em gradiente descontinuo de Percoll (250 μL de Percoll 45% + 250 μL de Percoll 90%) e centrifugada a 410x g, por 10 min. Após centrifugação, removeu-se o sobrenadante e, no pellet formado, ajustou-se a concentração em meio TALP (5x106 sptz/mL) e adicionou-se heparina (5 μg/ml). Essa amostra foi então incubada a 38,5ºC, por 2h, em estufa com 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N2. Ao final do presente desafio laboratorial, as mesmas análises seminais descritas para o grupo controle foram realizadas (Grupo Desafio). Por fim, as carac-terísticas seminais in vitro foram comparados com os resultados de fertilidade in vivo destas partidas de sêmen. Os dados de campo foram analisados por Regressão logística. Os resultados laboratoriais foram analisados por ANOVA e a comparação de medias. Em todos os testes foi considerado 5% de significância pelo software R. A taxa de concepção (TC) total dos seis tou-ros foi 49% (n= 890 vacas). O efeito do touro foi o fator mais importante (P = 0,007) no modelo geral da TC das vacas aos 30 dias após inseminação. Não foi observado efeito do ECC (P = 0,459), inseminador (P = 0,562) ou lote de fêmeas (P = 0,398), nem das interações (P > 0,05). Detectou-se maior (P < 0,05) fertilidade a campo do touro 6 em comparação aos touros 1 e 2. Com relação aos parâmetros seminais após a descongelação, foi observada maior (P = 0,0051) integridade de membrana (HOST) no touro 1 do que no touro 6. Adicionalmente, o touro 1 apresentou maior (P = 0,0001) fator de forma, menor (P = 0,0025) simetria antero-posterior e maior (P = 0,0141) Fourier 1 do que o touro 6. Na avaliação após o desafio, foram observadas maior motilidade visual (P = 0,0002) e vigor (P = 0,0005), no touro 6 do que no touro 1. Após o desafio, com relação as características morfométricas dos espermatozoides, apenas no fator forma as diferenças entre os touros 1 e 6 se mantiveram presentes, inferindo ser esta caracterís-tica intrínseca ao touro 1. Na integridade do DNA, não foram observadas diferenças entre os touros estudados, antes ou após o desafio. Conclui-se que o desafio laboratorial aqui proposto permitiu identificar diferenças na resistência in vitro de amostras seminais de diferentes touros, considerando os parâmetros motilidade visual e vigor, funcionalidade da membrana plasmática e motilidades total e progressiva do CASA. Entretanto, maiores estudos se fazem necessários para confirmar a real capacidade do presente desafio laboratorial de identificar touros de maior e/ou menor taxa de concepção. |
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Leticia Zoccolaro Oliveirahttp://lattes.cnpq.br/8997326783355094Marcelo Emilio BelettiAndre Maciel CrespilhoManoel Francisco Sá FilhoGabriel Augusto Monteirohttp://lattes.cnpq.br/4921092009280080José Andrés Nivia Riveros2022-08-01T13:17:51Z2022-08-01T13:17:51Z2022-02-18http://hdl.handle.net/1843/43832https://orcid.org/ 0000-0002-8326-2748O presente estudo teve por objetivo avaliar diferenças na resistência in vitro de amostras de sêmen bovino descongelado, depois de serem submetidas a um desafio laboratorial que mime-tiza condições do trato reprodutor das vacas, a fim de comparar as características seminais in vitro com a fertilidade in vivo dos diferentes touros avaliados. Foram utilizadas doses de sêmen de 6 touros, sendo avaliada uma partida de cada touro e três repetições por partida (n = 18). Para cada partida de sêmen, o seguinte procedimento foi realizado: inicialmente, a dose de sê-men (500 μL) foi descongelada à 37ºC por 30 seg (Grupo Controle) e foram avaliados: motili-dade, vigor, concentração, morfologia espermática, funcionalidade da membrana plasmática (teste hiposmótico; HOST), análise computadorizada da cinética espermática (CASA) e análise da integridade de cromatina e morfometria espermática pelo teste de azul de toluidina. Em se-guida, uma alíquota de 200 μL da amostra descongelada foi submetida ao teste de resistência seminal in vitro aqui proposto (chamado de desafio laboratorial). A alíquota de 200 μL foi depositada em gradiente descontinuo de Percoll (250 μL de Percoll 45% + 250 μL de Percoll 90%) e centrifugada a 410x g, por 10 min. Após centrifugação, removeu-se o sobrenadante e, no pellet formado, ajustou-se a concentração em meio TALP (5x106 sptz/mL) e adicionou-se heparina (5 μg/ml). Essa amostra foi então incubada a 38,5ºC, por 2h, em estufa com 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N2. Ao final do presente desafio laboratorial, as mesmas análises seminais descritas para o grupo controle foram realizadas (Grupo Desafio). Por fim, as carac-terísticas seminais in vitro foram comparados com os resultados de fertilidade in vivo destas partidas de sêmen. Os dados de campo foram analisados por Regressão logística. Os resultados laboratoriais foram analisados por ANOVA e a comparação de medias. Em todos os testes foi considerado 5% de significância pelo software R. A taxa de concepção (TC) total dos seis tou-ros foi 49% (n= 890 vacas). O efeito do touro foi o fator mais importante (P = 0,007) no modelo geral da TC das vacas aos 30 dias após inseminação. Não foi observado efeito do ECC (P = 0,459), inseminador (P = 0,562) ou lote de fêmeas (P = 0,398), nem das interações (P > 0,05). Detectou-se maior (P < 0,05) fertilidade a campo do touro 6 em comparação aos touros 1 e 2. Com relação aos parâmetros seminais após a descongelação, foi observada maior (P = 0,0051) integridade de membrana (HOST) no touro 1 do que no touro 6. Adicionalmente, o touro 1 apresentou maior (P = 0,0001) fator de forma, menor (P = 0,0025) simetria antero-posterior e maior (P = 0,0141) Fourier 1 do que o touro 6. Na avaliação após o desafio, foram observadas maior motilidade visual (P = 0,0002) e vigor (P = 0,0005), no touro 6 do que no touro 1. Após o desafio, com relação as características morfométricas dos espermatozoides, apenas no fator forma as diferenças entre os touros 1 e 6 se mantiveram presentes, inferindo ser esta caracterís-tica intrínseca ao touro 1. Na integridade do DNA, não foram observadas diferenças entre os touros estudados, antes ou após o desafio. Conclui-se que o desafio laboratorial aqui proposto permitiu identificar diferenças na resistência in vitro de amostras seminais de diferentes touros, considerando os parâmetros motilidade visual e vigor, funcionalidade da membrana plasmática e motilidades total e progressiva do CASA. Entretanto, maiores estudos se fazem necessários para confirmar a real capacidade do presente desafio laboratorial de identificar touros de maior e/ou menor taxa de concepção.The aim of this study was to evaluate in vitro resistance of frozen-thawed bovine semen after being submitted to a laboratory challenge that mimics conditions of the cow´s reproductive tract, and to compare in vitro semen characteristics with in vivo fertility of the bulls evaluated. Semen doses from 6 bulls were used, with one batch of each bull and three replications per batch being evaluated (n = 18). For each semen batch, the following procedure was performed: initially, the dose of semen (500 μL) was thawed at 37ºC for 30 seconds (Control Group) and the following parameters were evaluated: motility, vigor, concentration, sperm morphology, plasma membrane functionality (hyposmotic test; HOST), computerized analysis of sperm ki-netics (CASA) and analysis of chromatin integrity and sperm morphometry by the toluidine blue stain. Then, an aliquot of 200 μL of the thawed sample was submitted to the in vitro sem-inal resistance test proposed here (called laboratory challenge). The 200 μL aliquot was depos-ited on a discontinuous Percoll gradient (250 μL 45% Percoll + 250 μL 90% Percoll) and cen-trifuged at 410x g for 10 min. After centrifugation, the supernatant was removed and, in the pellet formed, concentration was adjusted in TALP medium (5x10 6 sptz/ml) and heparin (5 μg/ml) was added. This sample was then incubated at 38.5ºC for 2h at controlled atmosphere with 5% CO2, 5% O2 and 90% N2. At the end of the laboratory challenge, the same semen analyzes described for the control group were performed (Challenge Group). Finally, the in vitro semen characteristics were compared with the in vivo fertility results of these semen batches. Field data were analyzed by logistic regression. The laboratory results were analyzed by ANOVA. For all tests, a level of 5% significance was considered by the R software. The total conception rate (CR) for the six bulls was 49% (n= 890 cows). The bull effect was the most important factor (P = 0.007) in the overall model of CR at 30 days after insemination. No effect on CR was observed for Body Condition Score (P = 0.459), AI Technician (P = 0.562) or female lot (P = 0.398), nor their interactions (P > 0.05). Higher (P < 0.05) field fertility was detected in bull 6 compared to bulls 1 and 2. Regarding to the semen parameters after thawing, greater (P = 0.0051) membrane integrity (HOST) was observed for bull 1 compared to bull 6. Additionally, bull 1 demonstrated higher (P = 0.0001) Form Factor, lower (P = 0.0025) Antero-posterior Symmetry and larger (P = 0.0141) Fourier 1 than bull 6. In the post-challenge evalu-ation, greater visual motility (P = 0.0002) and vigor (P = 0.0005) were observed for bull 6 compared to bull 1. Only for the morphometric sperm trait Form Factor the differences between bulls 1 and 6 remained present, inferring that this sperm characteristic is intrinsic to bull 1. Regarding to the DNA integrity, no differences were observed between the bulls evaluated, before or after challenge. It was concluded that the laboratory challenge here proposed allowed to identify differences in the in vitro resistance of semen samples from different bulls, consid-ering the parameters visual motility and vigor, plasma membrane functionality and total and progressive motility of CASA. However, further studies are needed to confirm the real capacity of the present laboratory challenge to identify bulls with higher and/or lower conception rates.FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas GeraisporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em Ciência AnimalUFMGBrasilVETER - ESCOLA DE VETERINARIABovino de leiteReprodução animalSêmenCaracterísticas espermáticasAvaliação de características espermáticas após desafio laboratorial que mimetiza condições uterinas e sua relação com resultados de fertilidade em campoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALDissertação mestrado Jose Andres Nivia 2022.pdfDissertação mestrado Jose Andres Nivia 2022.pdfapplication/pdf1330424https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/43832/1/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20mestrado%20Jose%20Andres%20Nivia%202022.pdf7eb0e39895b1dd2bb554bc5c60fbd1ccMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/43832/2/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD521843/438322022-08-01 10:17:51.803oai:repositorio.ufmg.br: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ório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2022-08-01T13:17:51Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false |
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