| spelling |
Carlos Renato Machadohttp://lattes.cnpq.br/6306925202374274Francisco Pereira LoboSilvane Maria Fonseca Murtahttp://lattes.cnpq.br/4658913693256403Amanda Carolina da Silva Nunes2024-03-01T16:10:55Z2024-03-01T16:10:55Z2023-04-05http://hdl.handle.net/1843/65079Trypanosoma cruzi é o causador da doença de Chagas, que afeta cerca de 8 milhões de pessoas em todo o mundo. T. cruzi apresenta alta diversidade genética, com linhagens híbridas e não híbridas. Atualmente, esse parasito é classificado em seis unidades de tipagem discreta (DTU): TcI até TcVI. Na literatura há relatos de eventos de troca genética e hibridização em T. cruzi, sendo esse um evento importante que pode impactar a diversificação e evolução desse organismo, podendo influenciar em características como patogenicidade e transmissão. Apesar disso, a maneira como a hibridização ocorre ainda não foi totalmente esclarecida. Um fato importante que já foi verificado é que genes envolvidos no processo de recombinação, como RAD51, são mais expressos em células híbridas, e alguns genes envolvidos no processo de meiose estão presentes no genoma de T. cruzi, como DMC1 e HAP2. Tendo em vista isso, nós avaliamos a formação de híbridos de T. cruzi em sua forma epimastigota, em diferentes DTUs. Mostramos que não somente T. cruzi de diferentes DTUs possuem a capacidade de hibridizar, como também conseguimos selecionar por FACS células que são um possível híbrido de duas DTUs diferentes (TcI e TcVI). O DNA desses clones foi extraído e genotipado. Testes de crescimento e resistência à radiação gama também foram realizados, revelando que os clones selecionados possuem características distintas de cada cepa parental. Foi avaliado também se diferentes condições, como meio de cultura com maior nutrição, ou quebra dupla de DNA, podem influenciar no aumento dos eventos de hibridização e foi visto que a nutrição pode estar relacionada com um maior número de aparecimento de células híbridas. O mesmo protocolo de FACS foi realizado para células geneticamente modificadas resistentes a diferentes tipos de antibióticos, independentemente. Clones foram isolados e selecionados em meio contendo ambos os antibióticos, e uma PCR para ambos os marcadores antibióticos foi realizada, mas curiosamente os clones amplificaram apenas um gene de resistência, apesar de sobreviver em meio contendo os dois antibióticos para seleção. Portanto, pode-se sugerir que existe uma via de reprodução sexual em T. cruzi, mas que este evento é raro e de complexa regulação.Trypanosoma cruzi causes Chagas disease, which affects about 8 million people worldwide. As a species, this parasite presents a high genetic diversity, with hybrid and non-hybrid strains. Currently, this parasite is classified into six discrete typing units (DTU): TcI through TcVI. In the literature, there are reports of genetic exchange and hybridization events between different strains, which can impact the diversification and evolution of this organism, and influence characteristics such as its pathogenicity and transmission. Despite its importance, the mechanisms underlying the hybridization phenomenon has not been fully characterized. Previous studies have shown that genes involved in the recombination process, such as RAD51, are more expressed in hybrid strains. Additionally, genes involved in meiosis, such as DMC1 and HAP2, are present in the T. cruzi genome. In this work, we evaluated the formation of hybrids between epimastigotes of different DTUs. Our results revealed that different DTUs have the ability to hybridize. By using FACS, we were able to select possible hybrid clones of the DTUs TcI and TcVI. These clones were genotyped and tested for the ability to grow in culture and to resist gamma radiation exposure. These experiments demonstrated that the selected clones have distinct characteristics from each parental strain. It was also tested whether different culturing conditions (autoclaved versus filtered LIT medium) or the induction of double DNA breakages could increase the frequency of the hybridization events. Among the tested conditions, it was observed that a higher number of hybrid parasites were formed in cultures maintained in filtered medium. This may be related to the higher nutrition quality retained by this sterilizing method. The same FACS protocol was performed to track the hybridization between parasites resistant to two different antibiotics. Hybrid clones could be isolated and selected in the presence of both antibiotics. Once again, parasites were genotyped. However, the PCR results revealed that only one of the antibiotic markers were present. All these results suggest that there is a sexual reproduction pathway in T. cruzi but this event is rare and hard to document.FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas GeraisporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em GenéticaUFMGBrasilICB - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLOGICASGenéticaTrypanosoma cruzifusão citoplasmáticahibridizaçãotroca genéticarecombinaçãoTrypanosoma cruziAnálise de híbridos de diferentes DTUs de Trypanosoma cruziAnalysis of hybrids of different Trypanosoma cruzi DTUsinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALAmanda Nunes - Dissertação Análise de híbridos de diferentes DTUs de Trypanosoma cruzi PDFA.pdfAmanda Nunes - Dissertação Análise de híbridos de diferentes DTUs de Trypanosoma cruzi PDFA.pdfapplication/pdf2362511https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/65079/3/Amanda%20Nunes%20-%20Disserta%c3%a7%c3%a3o%20An%c3%a1lise%20de%20h%c3%adbridos%20de%20diferentes%20DTUs%20de%20Trypanosoma%20cruzi%20PDFA.pdfc15641826041bcc6946cedee5a450482MD53LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/65079/4/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD541843/650792024-03-01 13:10:56.316oai:repositorio.ufmg.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2024-03-01T16:10:56Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
|