DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9ADHF3
Resumo: Durante seu ciclo de vida, o protozoário Trypanosoma cruzi causador da Doença de Chagas deve lidar com a ação deletéria de espécies reativas de oxigênio (ROS) no DNA, principalmente com 7,8-diidro-8-oxoguanina (8oxoG). Caso não seja reparada, a 8oxoG pode levar a transversões durante a divisão celular. Em mamíferos, a DNA polimerase beta (pol) está estritamente envolvida no reparo por excisão de bases (BER), que pode reparar danos oxidativos. Contudo, sua função ainda é pouco conhecida em T. cruzi. Ensaios de localização da pol por imunofluorescência revelaram uma localização nos sítios antipodais do DNA mitocondrial (kDNA) das formas epimastigota e amastigota replicativas. Contudo a polimerase se mostrou dispersa na matriz mitocondrial de formas tripomastigotas não-replicativas, sugerindo sua participação na replicação do kDNA. Adicionalmente, verificamos uma localização estrita da pol nos sítios antipodais do kDNA somente durante as fases G1/S e início da fase G2 de epimastigotas. Clones superexpressando a pol mostraram maiorresistência à H2O2 e benzonidazol quando comparado a células controle. A resistência a H2O2 é perdida após tratar as células com metoxiamina, que é um inibidor seletivo da via do BER. Verificamos também um nível reduzido de 8oxoG no cinetoplasto dos clones superexpressores de pol em relação ao controle. Curiosamente, um possível foco de reparo de DNA envolvendo a pol foi identificado nas imediações do kDNA de epimastigotas após tratamento com H2O2, localizado provavelmente na região cinetoflagelar. Em conjunto, os dados experimentais obtidos sugerem que a pol está participando de processos de replicação e reparo de danos oxidativos no DNA mitocondrial de T. cruzi.
id UFMG_093b518cf6d8e477310313fa009e0f23
oai_identifier_str oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-9ADHF3
network_acronym_str UFMG
network_name_str Repositório Institucional da UFMG
repository_id_str
spelling Carlos Renato MachadoSantuza Maria Ribeiro TeixeiraSantuza Maria Ribeiro TeixeiraDawidson Assis GomesLuciana de Oliveira AndradeJulio ScharfsteinCarlos Frederico Martins MenckBruno Luiz Fonseca Schamber Reis2019-08-13T07:51:41Z2019-08-13T07:51:41Z2010-03-19http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9ADHF3Durante seu ciclo de vida, o protozoário Trypanosoma cruzi causador da Doença de Chagas deve lidar com a ação deletéria de espécies reativas de oxigênio (ROS) no DNA, principalmente com 7,8-diidro-8-oxoguanina (8oxoG). Caso não seja reparada, a 8oxoG pode levar a transversões durante a divisão celular. Em mamíferos, a DNA polimerase beta (pol) está estritamente envolvida no reparo por excisão de bases (BER), que pode reparar danos oxidativos. Contudo, sua função ainda é pouco conhecida em T. cruzi. Ensaios de localização da pol por imunofluorescência revelaram uma localização nos sítios antipodais do DNA mitocondrial (kDNA) das formas epimastigota e amastigota replicativas. Contudo a polimerase se mostrou dispersa na matriz mitocondrial de formas tripomastigotas não-replicativas, sugerindo sua participação na replicação do kDNA. Adicionalmente, verificamos uma localização estrita da pol nos sítios antipodais do kDNA somente durante as fases G1/S e início da fase G2 de epimastigotas. Clones superexpressando a pol mostraram maiorresistência à H2O2 e benzonidazol quando comparado a células controle. A resistência a H2O2 é perdida após tratar as células com metoxiamina, que é um inibidor seletivo da via do BER. Verificamos também um nível reduzido de 8oxoG no cinetoplasto dos clones superexpressores de pol em relação ao controle. Curiosamente, um possível foco de reparo de DNA envolvendo a pol foi identificado nas imediações do kDNA de epimastigotas após tratamento com H2O2, localizado provavelmente na região cinetoflagelar. Em conjunto, os dados experimentais obtidos sugerem que a pol está participando de processos de replicação e reparo de danos oxidativos no DNA mitocondrial de T. cruzi.During its life cycle, the causative agent of Chagas Disease Trypanosoma cruzi must deal with the deleterious action of reactive oxygen species (ROS) on DNA, mainly 7,8-dihydro-8-oxoguanine (8oxoG). If unrepaired, 8oxoG can lead to transversions during cell division. In mammals, DNA polymerase beta (pol) is strictly involved in base excision repair (BER) of oxidative damage. However its biological function in T.cruzi is still uncertain. Immunofluorescent analysis revealed that pol is localized on antipodal sites of kinetoplast (kDNA) of replicative epimastigotes and amastigotes forms. Nevertheless, the polymerase was seen dispersed in non-replicative trypomastigote forms inside the mitochondrion matrix, suggesting its participation in kDNA replication. In addition, we verify that pol is strictly localized in kDNA antipodal sites between G1/S and early G2 phase of replicative epimastigotes. Clonesoverexpressing pol presented increased survival after treatment with H2O2 and benznidazol compared to control. However this resistance is lost after treating cells with methoxiamine, a potent BER inhibitor. We also verified that the overexpressing clones showed a reduced level of detected 8oxoG in kinetoplast when compared to control. Curiously, a possible DNA repair focus of pol was identified in the vicinity ofkinetoplast of epimastigotes wild type CL Brener cells after H2O2 treatment. We believe that this focus is a DNA repair focus probably mounted in kinetoflagellar zone after oxidative damage to kDNA. Taken together the experimental data obtained suggest participation of pol in DNA replication and repair of oxidative damages in kDNA of T. cruzi.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGTripanossoma cruziReparo do DNADNA polimerasesBioquímica e ImunologiaDNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruziinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALtese_bruno_luiz_reis.pdfapplication/pdf3900651https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9ADHF3/1/tese_bruno_luiz_reis.pdf28c8a4b61cc75e5b64a643229803e204MD51TEXTtese_bruno_luiz_reis.pdf.txttese_bruno_luiz_reis.pdf.txtExtracted texttext/plain219904https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9ADHF3/2/tese_bruno_luiz_reis.pdf.txt99cb579d035fe59c2a598d51c9db4ca1MD521843/BUOS-9ADHF32019-11-14 22:03:47.736oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-9ADHF3Repositório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-15T01:03:47Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi
title DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi
spellingShingle DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi
Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis
Bioquímica e Imunologia
Tripanossoma cruzi
Reparo do DNA
DNA polimerases
title_short DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi
title_full DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi
title_fullStr DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi
title_full_unstemmed DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi
title_sort DNA polimerase beta: uma proteína envolvida na replicação e reparo do DNA mitocondrial emTrypanosoma cruzi
author Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis
author_facet Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis
author_role author
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Carlos Renato Machado
dc.contributor.advisor-co1.fl_str_mv Santuza Maria Ribeiro Teixeira
dc.contributor.referee1.fl_str_mv Santuza Maria Ribeiro Teixeira
dc.contributor.referee2.fl_str_mv Dawidson Assis Gomes
dc.contributor.referee3.fl_str_mv Luciana de Oliveira Andrade
dc.contributor.referee4.fl_str_mv Julio Scharfstein
dc.contributor.referee5.fl_str_mv Carlos Frederico Martins Menck
dc.contributor.author.fl_str_mv Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis
contributor_str_mv Carlos Renato Machado
Santuza Maria Ribeiro Teixeira
Santuza Maria Ribeiro Teixeira
Dawidson Assis Gomes
Luciana de Oliveira Andrade
Julio Scharfstein
Carlos Frederico Martins Menck
dc.subject.por.fl_str_mv Bioquímica e Imunologia
topic Bioquímica e Imunologia
Tripanossoma cruzi
Reparo do DNA
DNA polimerases
dc.subject.other.pt_BR.fl_str_mv Tripanossoma cruzi
Reparo do DNA
DNA polimerases
description Durante seu ciclo de vida, o protozoário Trypanosoma cruzi causador da Doença de Chagas deve lidar com a ação deletéria de espécies reativas de oxigênio (ROS) no DNA, principalmente com 7,8-diidro-8-oxoguanina (8oxoG). Caso não seja reparada, a 8oxoG pode levar a transversões durante a divisão celular. Em mamíferos, a DNA polimerase beta (pol) está estritamente envolvida no reparo por excisão de bases (BER), que pode reparar danos oxidativos. Contudo, sua função ainda é pouco conhecida em T. cruzi. Ensaios de localização da pol por imunofluorescência revelaram uma localização nos sítios antipodais do DNA mitocondrial (kDNA) das formas epimastigota e amastigota replicativas. Contudo a polimerase se mostrou dispersa na matriz mitocondrial de formas tripomastigotas não-replicativas, sugerindo sua participação na replicação do kDNA. Adicionalmente, verificamos uma localização estrita da pol nos sítios antipodais do kDNA somente durante as fases G1/S e início da fase G2 de epimastigotas. Clones superexpressando a pol mostraram maiorresistência à H2O2 e benzonidazol quando comparado a células controle. A resistência a H2O2 é perdida após tratar as células com metoxiamina, que é um inibidor seletivo da via do BER. Verificamos também um nível reduzido de 8oxoG no cinetoplasto dos clones superexpressores de pol em relação ao controle. Curiosamente, um possível foco de reparo de DNA envolvendo a pol foi identificado nas imediações do kDNA de epimastigotas após tratamento com H2O2, localizado provavelmente na região cinetoflagelar. Em conjunto, os dados experimentais obtidos sugerem que a pol está participando de processos de replicação e reparo de danos oxidativos no DNA mitocondrial de T. cruzi.
publishDate 2010
dc.date.issued.fl_str_mv 2010-03-19
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2019-08-13T07:51:41Z
dc.date.available.fl_str_mv 2019-08-13T07:51:41Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9ADHF3
url http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9ADHF3
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade Federal de Minas Gerais
dc.publisher.initials.fl_str_mv UFMG
publisher.none.fl_str_mv Universidade Federal de Minas Gerais
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFMG
instname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
instacron:UFMG
instname_str Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
instacron_str UFMG
institution UFMG
reponame_str Repositório Institucional da UFMG
collection Repositório Institucional da UFMG
bitstream.url.fl_str_mv https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9ADHF3/1/tese_bruno_luiz_reis.pdf
https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9ADHF3/2/tese_bruno_luiz_reis.pdf.txt
bitstream.checksum.fl_str_mv 28c8a4b61cc75e5b64a643229803e204
99cb579d035fe59c2a598d51c9db4ca1
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1803589229732691968

Registros relacionados