Papel da atividade neuronal sensorial e resposta quimioterápica à cisplatina no fenômeno de transição epitélio-mesenquimal (EMT) no câncer de pulmão de células não-pequenas (NSCLC))

• Autor(a) principal: Bryan Ôrtero Perez Gonçalves
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/58344
• topic: Câncer de pulmão; Cisplatina; Inervação Sensorial; EMT; RTX; Fisiologia; Neoplasias pulmonares; Transição Epitelial-Mesenquimal; Euphorbia resinífera; Cisplatino; Sistema nervoso

O fenômeno de transição epitélio-mesenquimal (EMT) é tradicionalmente associado à migração celular durante o desenvolvimento embrionário ou na cicatrização de feridas, entretanto, hoje sabe-se que este mecanismo possui um papel fundamental na invasão e metástase de tumores sólidos. Assim, utilizando-se do estado da arte, o objetivo principal deste estudo foi avaliar a participação deste evento in-vitro, na linhagem celular de câncer de pulmão de células não- pequenas (NSCLC), LLC1, nos modelos monocamada (MN) e de enriquecimento de células tronco do câncer (CSC’s) por meio da formação de tumoresferas (TE). Além disso, buscamos elucidar como o tratamento com cisplatina ou a depleção de neurônios sensoriais podem modular o evento EMT no câncer de pulmão in vivo. Para alcançar os objetivos aqui propostos, determinamos o IC50 para células LLC1 tratadas com o quimioterápico cisplatina. O estado transcricional dos genes reguladores de EMT (Zeb1, Zeb2, Twist, Snail e FoxA2) e os alvos a jusante desses fatores de transcrição (E-caderina, Tgfb1, Vimentina, Fibronectina e N- caderina), além dos genes de pluripotência (Sox2, Oct-4 e Nanog), foram avaliados por qPCR. Avaliamos a expressão do marcador epitelial E-caderina e das proteínas mesenquimais fibronectina, vimentina e N-caderina pela técnica de imunofluorescência. Para caracterizar subpopulações celulares com perfis de CSCs-like (CD44+ / CD133+ / ALDH+ / CD24+) e o estado proliferativo (Ki-67+) realizamos imunofenotipagem por citometria de fluxo. As células LLC1 foram tratadas com o meio condicionado isolado a partir do cultivo in-vitro de neurônios sensoriais extraídos do gânglio da raiz dorsal de animais C57Bl/6J, ou colocadas em co-cultura no sistema transwell. Finalmente, células LLC1 foram inoculadas via subcutânea (S.C) em animais C57Bl/6J que tiveram seus neurônios sensoriais depletados por meio do tratamento farmacológico com a resiniferotoxina (RTX) ou que foram tratados somente com o quimioterápico cisplatina. Desta forma, caracterizamos o microambiente dos tumores oriundos do crescimento das células LLC1 por meio da imunofenotipagem para CSCs de pulmão e células imunes, além da avaliação do perfil transcriptômico dos genes envolvidos no fenômeno EMT, pluripotência e morte celular programada por apoptose. Entre os resultados obtidos destacam-se: (I) regulação positiva da expressão dos transcritos reguladores do fenômeno EMT e dos genes de pluripotência após tratamento com cisplatina in-vitro e presença de células com perfil de CSCs mesmo após o tratamento com cisplatina; (II) aumento do IC50 na MN e TE tratada com cisplatina diluída em meio condicionado; (III) presença de um fenótipo híbrido nas células LLC1 em co-cultura com neurônios sensoriais, com expressão da proteína epitelial E- caderina e mesenquimal, vimentina, nas células tumorais; (IV) ausência de fibras sensoriais no tumor primário de animais tratados com cisplatina, semelhante a depleção com RTX; (V) aumento do volume, peso e área dos tumores de animais que tiveram os neurônios sensoriais depletados com RTX; (VI) diminuição das proteínas E-caderina, N-caderina, fibronectina e vimentina, redução de células com perfil CSCs-like e de células do sistema imunológico, nos tumores primários de animais tratados com cisplatina ou que tiveram os neurônios depletados com RTX. Sendo assim, nossos achados dão forte suporte a ideia de que fibras nervosas sensoriais estabelecem um crosstalk com o microambiente tumoral e que o tratamento com cisplatina pode afetar a presença dessas fibras no tumor primário. Desta forma, espera-se que os dados gerados possam contribuir para o entendimento de como as fibras nervosas sensoriais podem modular a complexidade celular do tumor, abrindo espaço para potenciais abordagens terapêuticas.