Mecanismos de secreção de eosinófilos: compartimentalização e tráfego vesicular de sintaxina-17, CD63 e interferon-gama

• Autor(a) principal: Lívia Andressa Silva do Carmo
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/35394
• topic: Biologia celular; Eosinófilos; Tetraspanina 30; Interferon gama

Os eosinófilos são leucócitos do sistema imune inato, capazes se secretar inúmeras moléculas que são armazenadas pré-formadas dentro de seus grânulos secretores (específicos). Essa secreção pode ocorrer por: (i) desgranulação por piecemeal (PMD), mediada por vesículas, principalmente carreadores de grande porte conhecidos como vesículas sombrero (EoSVs) que brotam dos grânulos e levam os produtos até a superfície celular; (ii) exocitose clássica, caracterizada por fusão de grânulos individuais com a membrana plasmática; (iii) exocitose composta, quando há fusão grânulo-grânulo antes da liberação extracelular e (iv) citólise, deposição de grânulos intactos após a lise celular. Considerando que a atividade funcional dos eosinófilos depende de sua capacidade secretora, o estudo dos mecanismos de secreção, bem como das proteínas envolvidas e de seu tráfego intracelular são importantes para o entendimento das respostas de eosinófilos durante doenças alérgicas e inflamatórias. Uma proteína relacionada com secreção de eosinófilos é o CD63, molécula da família das tetraespaninas, enquanto a sintaxina-17 (STX17) é uma proteína SNARE envolvida na fusão de vesículas durante a secreção constitutiva e potencialmente no transporte de cargas especificas em células especializadas. A molécula de interferon-gama (IFN-γ) é encontrada em grande quantidade em eosinófilos, com papel importante na resposta inflamatória. Entretanto, o tráfego intracelular dessas proteínas e seu envolvimento nos mecanismos de secreção de eosinófilos é desconhecido. Neste trabalho, foram investigados a localização ultraestrutural e o tráfego intracelular das moléculas de CD63, STX17 e IFN-γ em eosinófilos humanos estimulados ou não com os mediadores inflamatórios CC-chemokine ligand 11- CCL11 e fator de necrose tumoral -TNF-α). Em paralelo, foi verificada se eosinófilos humanos secretam vesículas extracelulares (VEs), que podem estar associadas com respostas imunes. Técnicas de microscopia eletrônica (convencional e imunomarcação ultraestrutural/pre-embedding immunonanogold), além de citometria de fluxo e western blotting foram utilizadas para responder essas questões. Primeiramente foi demonstrado que a STX17 se localiza em grânulos e EoSVs em eosinófilos humanos, as quais são estruturas fundamentais na secreção de eosinófilos. Foi evidenciado também que o CD63 está fortemente associado com os processos de secreção de eosinófilos (PMD e exocitose composta) e que as EoSVs atuam translocando o CD63 de/para grânulos secretores. Em outras análises, demonstrouse que o IFN-γ é localizado em grânulos secretores de eosinófilos humanos e pode ser transportado em EoSVs para a periferia celular após a estimulação das células. Interessantemente, verificou-se que eosinófilos humanos produzem microvesículas (VEs produzidas diretamente da membrana plasmática) que essa produção é aumentada quando estas células respondem a estímulos inflamatórios. Em conclusão, nossos resultados levaram a importantes descobertas sobre a atividade secretora de eosinófilos e de moléculas associadas à mesma, contribuindo para o entendimento sobre as reações mediadas por eosinófilos frente a ambientes inflamatórios.