Avaliação da vacina de Anaplasma marginale utilizando rMSP1a funcionalizada a nanotubos de carbono, associado ao antígeno inativado produzido in vitro: Parâmetros imunológicos, clínicos e a proteção induzida em bezerros, após desafio experimental

• Autor(a) principal: Bruna Torres Silvestre da Silva
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/34806
• topic: Anaplasma marginale; Vacina inativada; MSP1a; Nanotubos de carbono; Parasitologia; Anaplasma marginale; Nanotubos de carbono

Anaplasmose bovina é uma doença infecciosa causada pela riquétsia intraeritrocitária A. marginale. Atualmente não há uma vacina inativada comercialmente disponível. Vacinas inativadas produzidas em células IDE8 falharam devido a ausência da expressão da MSP1a nas riquetsias cultivadas neste sistema. Camundongos imunizados com rMSP1a, utilizando nanotubos de carbono (MWNT) como molécula carreadora, apresentaram resposta celular e humoral significativa, indicando que esta tecnologia possa auxiliar no desenvolvimento de vacina inativada. Desta forma, o presente estudo avaliou o efeito da imunização de bezerros com MWNT funcionalizado com rMSP1a, associado com a vacina inativada de A. marginale produzida in vitro, na indução da resposta imunológica, no controle da riquetsemia e no desenvolvimento da doença clínica após desafio experimental com amostra heteróloga A. marginale UFMG1. A rMSP1a foi expressa em Escherichia coli BL21, purificada e ligada covalentemente à MWNTs. Extrato solúvel de A. marginale (AmUFMG2) foi produzido em cultivo in vitro da riquétsia em células IDE8. No Capítulo I foi avaliado a resposta humoral e celular dos bezerros imunizados nos diferentes protocolos e possíveis efeitos tóxicos desta imunização. Para isso, vinte e quatro bezerros machos foram divididos em quatro grupos e imunizados (via SC) com três doses, 21-21 dias, no esquema: G1 (controle), G2 (AmUFMG2), G3 (MWNT+rMSP1a) e G4 (AmUFMG2 e MWNT+rMSP1a). Amostras de sangue foram coletadas para a contagem global de leucócitos, avaliação da resposta imune e análise bioquímica. A imunização com MWNT+rMSP1a induziu aumento na contagem de leucócitos totais, no número de células NK circulantes, na população de linfócitos T CD4+, CD8+, linfócitos T ativados, células B e níveis elevados de anticorpos IgG, IgG1 e IgG2. Além disso, os MWNTs não induziram alterações no perfil bioquímico, indicando que MWNT+rMSP1a foi capaz de induzir resposta celular e humoral significativa, sem gerar toxicidade. No Capítulo II foram avaliados as alterações imunológicas, os parâmetros clínicos e parasitológicos de bezerros imunizados e experimentalmente desafiados com a amostra heteróloga A. marginale UFMG1. Quinze bezerros machos foram divididos em três grupos e imunizados (via SC) com três doses, 21-21 dias, no esquema: G1 (controle), G2 (MWNT+rMSP1a) e G3 (AmUFMG2 e MWNT+rMSP1a). Após as imunizações, os animais foram desafiados com 4x107 eritrócitos infectados com A. marginale UFMG1. Parâmetros clínicos, tais como temperatura retal, volume globular, riquetsemia e escore clínico foram avaliados. Amostras de sangue foram coletadas para a análise da resposta celular e humoral. Animais do G3 apresentaram redução significativa dos níveis de riquetsemia, escore clínico moderado, melhor capacidade de recuperação do volume globular e forte resposta de IgG2. Estes resultados sugerem que a combinação de antígenos presentes no imunógeno recebido pelo grupo G3 foi capaz de proteger os animais do escore grave, permitindo que novas abordagens sejam realizadas utilizando a vacina inativada produzida in vitro associada com rMSP1a.