Caracterização fenotípica e genotípica de cepas de Mycobacterium tuberculosis e resistentes às drogas antituberculosas Hospital Júlia Kubstschek, Minas Gerais 2001-2002

• Autor(a) principal: Wanessa Trindade Clemente
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/66974
• topic: Caracterização Fenotípica; Mycobacterium tuberculosis; Resistência a Drogas Antituberculosas; Testes de Sensibilidade; Fenotípica de Cepas; Estudo Molecular; Tuberculose; Tuberculose Resistente a Múltiplos Medicamentos; Mycobacterium tuberculosis; Testes de Sensibilidade Microbiana; Resistência a Medicamentos

No contexto de crescente incidência de tuberculose (TB) e tuberculose multidroga resistente (TB-MDR), torna-se fundamental a detecção rápida da resistência, possibilitando tratamento eficaz e introdução de medidas para controle da disseminação. A caracterização de resistência às drogas antituberculosas (anti-TB), através de testes de sensibilidade e estudo molecular, ganhou importância durante as últimas décadas. Entretanto, sua disponibilidade está comprometida, principalmente em países em desenvolvimento. Este estudo caracterizou a resistência de cepas de Mycobacterium tuberculosis do Estado de Minas Gerais (MG) às principais drogas anti-TB, comparando mutações genéticas, nível de resistência e dados clínico-epidemiológicos dos portadores. Avaliaram-se dados clínico-epidemiológicos de 160 pacientes com TB presumida, atendidos no Hospital Júlia Kubitschek. Desses, selecionaram-se 76 amostras pulmonares de portadores de maior risco para desenvolvimento de TB resistente, que foram submetidas à avaliação da resistência às drogas anti-TB (isoniazida, rifampicina, pirazinamida, etambutol e estreptomicina), através de: (a) teste de sensibilidade (TS) radiométrico qualitativo e quantitativo, com determinação da concentração inibitória mínima (CIM); (b) genotipagem pela análise do polimorfismo de sequências geradas pela digestão por endonucleases (RFLP); (c) sequenciamento do DNA dos principais genes associados à resistência a isoniazida, pirazinamida e etambutol (katG, ahpC, inhA, pncA, embB); e (d) hibridização reversa PCR reverse line blot hybridization para o gene associado à resistência a rifampicina (rpoB). Das 76 amostras avaliadas pelo teste de sensibilidade, 24 (31,6 %) demonstraram resistência a pelo menos uma das drogas anti-TB testadas. Os portadores dessas cepas apresentaram maior frequência prévia de TB e exposição a drogas anti-TB. A resistência adquirida foi quatro vezes mais frequente que a resistência primária, sendo que 19 (79,0%) pacientes apresentaram exposição prévia a drogas e 4 (16,6%) não. Nenhuma das cepas resistentes apresentou padrão similar no RFLP, fato que diminui a probabilidade de correlação epidemiológica entre elas. Das cepas resistentes, 87,5% (21/24) foram resistentes à isoniazida; 70,8% (17/24) à rifampicina; 54,2% (13/24) à estreptomicina; 43,5% (10/23) à pirazinamida e 41,7% (10/24) ao etambutol. A maior parte das cepas estudadas (17/24; 70,8%) foram MDR, considerando resistência combinada a rifampicina e isoniazida, e dessas apenas 40,0% (7/17) não apresentaram resistência adicional. Das 10 cepas multidroga resistente (MDR) (10/17; 59,0%) que apresentaram resistência combinada, oito apresentaram resistência ao etambutol e a estreptomicina. Cepas resistentes no TS qualitativo apresentaram níveis distintos de sensibilidade às drogas no teste quantitativo. O TS quantitativo não apresentou capacidade discriminatória para resistência à estreptomicina. As cepas resistentes à isoniazida apresentaram mutações nos genes katG (75,0%) e ahpC (20,0%), e nenhuma mutação no gene inhA. Mutações no gene rpoB foram observadas em 78,6% dos isolados rifampicina resistentes. A detecção de mutação nos genes katG e rpoB, em combinação, identificou a maioria das cepas MDR (88,2%). Mutações do gene pncA foram identificadas em 62,5% das cepas pirazinamida resistentes. Quanto àquelas resistentes ao etambutol observaram-se mutações do embB em 71,4% das cepas. Para essa amostragem, considerando a elevada frequência de resistência combinada, demonstra-se válida a realização de TS qualitativo e quantitativo para as drogas anti-TB, naqueles pacientes com suspeita de TB resistente. Em relação à análise genética observa-se que a detecção de portadores de cepas MDR seria eficaz em 88,2% dos casos, se utilizada pesquisa de mutação dos genes katG e rpoB em combinação, com resultado mais precoce que os testes convencionais e boa correlação com CIM elevada. A avaliação de mutações embB e pncA identifica apenas cerca de 60% a 70% das cepas resistentes ao etambutol e pirazinamida. A inatividade da pirazinamidase não é bom marcador de resistência, apesar de relacionado com CIM elevada para pirazinamida. Assim, o uso de técnicas moleculares parece promissor na identificação rápida do portador de cepas resistentes, com conseqüente benefício clínico-epidemiológico. Entre 2000 a 2008 foram publicados nove estudos brasileiros que abordaram a avaliação molecular da tuberculose resistente. Esse estudo apresenta casuística expressiva dos casos de MDR notificados do Estado (cerca de 60%) para o período do estudo, sendo o primeiro que avalia seis mutações gênicas associadas às quatro principais drogas anti-TB em combinação, caracterizando a resistência em seus aspectos fenotípicos e genotípicos.