Instabilidade de microssatélites em carcinoma colorretal de pacientes jovens por técnicas de biologia molecular em amostras processadas rotineiramente para diagnóstico anátomo-patológico

• Autor(a) principal: Ernanda Raquel de Queiros G. de S. e Fernandes
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/ECJS-78HGHK
• topic: Patologia; Neoplasias colorretais/imunologia; Inclusão em parafina; Repetições de microssatélites; Adulto; Neoplasias retais/imunologia; Instabilidade de microssatélites; Neoplasias colorretais/patologia; Reação em cadeia da polimerase; Neoplasias retais/patologia; Adolescente

Introdução: O câncer colorretal (CCR) é a segunda neoplasia mais comum nos países em desenvolvimento depois do câncer de pulmão em homens e do câncer de mama em mulheres. Os microssatélites são seqüências curtas repetitivas de nucleotídeos presentes em todogenoma humano, susceptíveis a expandir-se ou contrair-se durante a replicação do DNA. Nos tumores com deficiência nos genes de reparo do DNA (MMR), essas expansões ou contrações não são reparadas, ocasionando o fenômeno de instabilidade de microssatélites (IMS), quepode ser alta (IMS-A) ou baixa (IMS-B). Os microssatélites são considerados marcadores fenotípicos de prognóstico, de resposta terapêutica e de identificação de pacientes com mutações nos MMR. Pacientes com mutações nos MMR estão predispostos a desenvolver asíndrome do câncer colorretal não-poliposo hereditário (HNPCC). A IMS foi descrita na maioria dos CCR de pacientes com HNPCC (5%) e em cerca de 15% dos tumores esporádicos. Assim, a avaliação da IMS no CCR reveste-se de enorme importância prática e há a idéia de que, num futuro próximo, sua pesquisa seja sugerida como complemento dodiagnóstico e prognóstico nestes tumores. Objetivos: Padronizar o método de biologia molecular para a detecção de IMS em amostras de CCR de pacientes jovens processadas rotineiramente para diagnóstico anátomo-patológico, caracterizar a IMS em alta ou baixa, correlacionar a presença e o tipo de IMS com as características anátomo-patológicas do CCR. Material e métodos: Foram estudados 48 CCR de pacientes com idade igual ou inferior a 40 anos. Os casos selecionados foram provenientes de material emblocado em parafina. Selecionaram-se à microscopia óptica, as áreas mais adequadas do tumor e da mucosa normal, de um mesmo paciente, para a realização dos testes moleculares, feitos através da reação em cadeia da polimerase (PCR). As extrações foram feitas utilizando-se kit comercial. As eletroforeses foram feitas em gel de poliacrilamida. Os microssatélites testados foram BAT25, BAT26, D2S123, D5S346 e D17S250[Mfd15CA]. Resultados: Extraiu-se DNA adequado para a pesquisa de IMS em todos os casos, à exceção de um caso, pois apenas um microssatélite amplificou (BAT26). O microssatélite com maior freqüência de amplificações foi o BAT26 (100%) e o menos freqüente foi o D2S123 (83,3%); 21 casos (43,8%)apresentaram-se microssatélites estáveis (MSE), 24 casos (50%) apresentaram-se com IMS, 15 casos (62,5%) com IMS-A e sete casos (29,2%) com IMS-B. A maioria dos CCR (60,5%) localizava-se no cólon esquerdo, eram predominantemente anulares-constritivos (39,6%). Aresposta linfocítica era discreta ou ausente na maior parte dos casos (58,1%). A maioria dos tumores foi estadiada como pT3 (67,4%) e 14 casos (38,9%) tinham metástases em linfonodos. Os tumores com instabilidade eram mais freqüentes em homens, localizavam-sepreferencialmente no cólon direito e a resposta linfocítica era mais freqüentemente encontrada. Conclusões: O resultado da detecção da amplificação alélica do DNA variou conforme o microssatélite testado. O microssatélite mais sensível foi o BAT26 (100%) e o menos sensível foi o D2S123 (83,3%). A freqüência de casos MSE foi menor que a de casoscom IMS. Entre os casos instáveis, a freqüência de casos com IMS-A foi maior que a de casos com IMS-B. Nos casos com IMS-B não foi encontrada instabilidade nos microssatélites mononucleotídeos (BAT25 e BAT26). Os CCR com IMS foram mais freqüentes em homens,localizavam-se preferencialmente no cólon direito, com macroscopia anular-constritiva, com resposta linfocítica peritumoral de discreta a moderada.