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Jenner Karlisson Pimenta dos ReisIzabelle Silva RehfeldJoão Helder Frederico de Farias NavesBruna Lopes Bueno2019-08-11T08:54:33Z2019-08-11T08:54:33Z2019-02-08http://hdl.handle.net/1843/SMOC-BB3HABA anemia infecciosa equina (AIE), doença causada pelo vírus da anemia infecciosa equina (Equine infectious anemia vírus - EIAV), é considerada um obstáculo para o desenvolvimento da equideocultura. O EIAV é transmitido por insetos hematófagos, principalmente da família Tabanidae e também pela forma iatrogênica. A AIE não tem tratamento, nem vacina e a patogênese, assim como a resposta imune do hospedeiro contra o vírus não são totalmente compreendidas. Além disso, o desempenho do diagnóstico laboratorial por testes sorológicos é questionado. Nesse sentido, o método imuno-histoquímico tem sido utilizado para aumentar o conhecimento sobre o tropismo e a patogenicidade de vários agentes infecciosos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um ensaio imuno-histoquímico para detecção de antígenos virais em tecidos e órgãos de equídeos naturalmente infectados pelo EIAV. Fragmentos de órgãos de equídeos (n = 6) de Apodi - RN, Brasil, diagnosticados como positivos para AIE em testes sorológicos foram fixados em formalina tamponada a 10% e embebidos em parafina histológica. Cortes histológicos foram aderidos em lâminas de vidro polarizadas e a antigenicidade recuperada pelo calor, utilizando tampão citrato (pH = 6). Estas secções foram incubadas com anticorpo policlonal anti-EIAV overnight e, mais tarde, com anticorpo secundário anti-IgG equino conjugado com peroxidase (Sigma - Aldrich) durante 50 minutos. A reação antigeno/anticorpo foi revelada com o kit ImmPACTTM DAB Peroxidase Substrate (Vector Laboratories), contrastado com hematoxilina de Mayer (Sigma-Aldrich). Antígenos do EIAV foram observados na região intracitoplasmática do baço, fígado, rins e células pulmonares. Marcações imuno-histoquímicas estavam presentes principalmente na polpa vermelha do baço, uma região com abundância de macrófagos, e nos sinusóides hepáticos, onde as células de Kupffer (macrófagos hepáticos) se encontram. As imunomarcações também estavam presentes no epitélio bronquiolar e no septo alveolar, assim como no epitélio dos túbulos distal e proximal dos rins. A maior quantidade de EIAV foi observada no baço e no fígado, locais normalmente repletos de macrófagos, confirmando o tropismo viral pelos fagócitos mononucleares. No entanto, a presença de EIAV em células epiteliais do pulmão e rim indica que o vírus também pode infectar outros tipos de células além dos macrófagos, possibilitando a eliminação do mesmo na urina e nas secreções oronasais, propiciando novos mecanismos de transmissão que devem ser investigados.Equine infectious anemia (EIA), a disease caused by Equine infectious anemia virus (EIAV), is considered an obstacle to the development of horse industry. EIAV is transmitted by hematophagous insects mainly of the Tabanidae family and also iatrogenicaly. EIA has no treatment or vaccine and pathogenesis, as well as immune response against the virus are not fully understood. Also, the performance of laboratorial diagnosis by serological tests can be poor or limited. In this sense, the immunohistochemistry method has been used to enhance the knowledge about tropism and pathogenicity of several infectious agentes, such as viruses. Therefore, the objective of this work was the development of an immunohistochemical assay for detection of viral antigens in tissues and organs of naturally EIAV infected equids. Fragments of organs of equids (n=6) from Apodi RN, Brazil, diagnosed as positive for EIA by serological tests were fixed in 10% buffered formalin and paraffin-embedded. Histological sections were collected on polarized slides and antigenicity recovered by heat, using citrate buffer (pH=6). These sections were incubated with polyclonal antibody overnight, and later, with peroxidase-conjugated secondary antibody (Sigma Aldrich) for 50 minutes. Antigen/antibody reaction was revealed with the ImmPACT DAB Peroxidase Substrate (Vector Laboratories) kit counterstained with hematoxylin (Sigma-Aldrich). EIAV antigens were observed in intracytoplasmic region of spleen, liver, kidneys and lungs cells. Immunohistochemical marks were present mainly in red pulp of the spleen, a region with plenty of macrophages, and in hepatic sinusoids, where Kupffer cells (liver macrophages) lies. In addition, marks were found in bronchiolar epithelium and alveolar septum, as well as in epithelium of distal and proximal tubule of kidneys. The highest amount of EIAV was observed in spleen and liver, sites normally full of macrophages, confirming viral tropism to the mononuclear phagocytes. However, presence of EIAV in epithelial cells of lungs and kidneys indicates that the virus may also infect other types of cells besides macrophages, making possible elimination of virus in urine and in oronasal secretions, and facilitating new transmission mechanisms that must be investigated.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGAnemia infecciosa equinaImunohistoquímicaEquino DoençastecidopatogeniaEIAVimuno-histoquímicaAnemia Infecciosa EquinatropismoCaracterização imuno-histoquímica e molecular de equídeos naturalmente infectados pelo vírus da anemia infecciosa equinainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALbruna_lopes_bueno.pdfapplication/pdf2934187https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/SMOC-BB3HAB/1/bruna_lopes_bueno.pdfeec9e1997214084b8b411ba3b33d23ecMD51TEXTbruna_lopes_bueno.pdf.txtbruna_lopes_bueno.pdf.txtExtracted texttext/plain171994https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/SMOC-BB3HAB/2/bruna_lopes_bueno.pdf.txtb03c28e37e46aee302b3d2656f29ad2eMD521843/SMOC-BB3HAB2019-11-14 06:31:18.546oai:repositorio.ufmg.br:1843/SMOC-BB3HABRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T09:31:18Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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