Isolamento e caracterização de células-tronco/progenitoras a partir de cultivo in vitro de linhagens celulares de carcinoma de mama humana

• Autor(a) principal: Milene Pereira Moreira
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-97YG7V
• topic: Mamoesferas; Linhagem celular; Câncer de mama; Cultura tridimensional; Células-tronco do câncer; Células-tronco; Neoplasias da mama; Imagem tridimensional; Células-tronco neoplásicas; Células Cultura e meios de cultura; Linhagem celular tumoral; Mama Câncer; Expressão gênica

O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais frequente no mundo e o mais comum entre as mulheres. É um grupo heterogêneo de neoplasias, possivelmente devido à existência de uma pequena subpopulação de células nesses tumores com propriedades de células-tronco, denominadas células-tronco do câncer (CSCs). A teoria da CSCs propõe uma organização hierárquica de células dentro do tumor, em que as CSCs são responsáveis por sustentar o crescimento do tumor , pela resistência do tumor a terapias convencionais e recorrência da doença. Células com características funcionais de células-tronco/progenitoras podem ser isoladas de células mamárias e propagadas in vitro como esferas não aderentes, denominadas mamoesferas. Sendo assim, esse trabalho teve como objetivo caracterizar linhagens celulares humanas de carcinoma de mama BT-549 e Hs 578T, mamoesferas-derivadas obtidas a partir delas cultivadas in vitro em substratos plásticos (2D) e em sistema tridimensional (Matrigel). Para isso foi feito caracterização por microscopia óptica (Faloidina/DAPI, Image it, -tubulina, E-caderina e VE-caderina) e por citometria de fluxo (CD90, CD146, CD105, CD31, CD34, CD45 e CD24) e, análise do perfil de expressão por qRT -PCR dos genes ERBB2, KRT5, MKI67, CDH3 e TP63. Os resultados obtidos mostram que ambas as linhagens celulares cultivadas em 2D e em 3D, expressam -tubulina, com exceção da linhagem Hs 578T cultivada em 3D, e não expressão E-caderina e VE-caderina. A imunofenotipagem classificou a linhagem BT-549 como CD90+ /CD146+/CD105+/CD31-/CD34-/CD45-/CD24+e a linhagem Hs 578T como CD90+/CD146+/CD105+/CD31-/CD34-/CD45-/CD24-. As linhagens celulares cultivadas em Matrigel formaram estruturas tridimensionais e apresentaram uma expressão diferencial dos genes analisados em comparação com as linhagens cultivadas em 2D. Sob condições indiferenciadas essas células formaram mamoesferas -derivadas, sendo que a linhagem celular BT-549 apresentou melhor resultado. As mamoesferas-derivadas e as mamoesferas cultivadas em 3D apresentaram expressão de -tubulina e ausência de expressão de E-caderina e VE-caderina. A análise de expressão gênica mostrou que as mamoesferas-derivadas apresentam expressão diferencial dos genes estudados quando comparadas as linhagens parentais, sugerindo indícios da participação desses genes na formação das mamoesferas. Em cultivo 3D, as mamoesferas parecem sofrer diferenciação e apresentam uma expressão diferencial dos genes analisados em relação às mamoesferas-derivadas das linhagens celulares. Com base nos nossos resultados, a BT-549 parece ser um bom modelo de estudo in vitro das CSCs, sendo os genes ERBB2 e TP63 potenciais marcadores para as CSCs.