Clonagem, expressão e caracterização imunológica da proteína Pb40r presente na fração protetora F0 de paracoccidioides brasiliensis

• Autor(a) principal: Viviane Cristina Fernandes
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8H6QU3
• topic: paracoccidioides; clonagem; Paracoccidioides x; Bioquímica; Clonagem

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma das mais importantes micoses endêmicas da América Latina; ela é usualmente diagnosticada pela observação e/ou isolamento do seu agente etiológico Paracoccidioides brasiliensis, assim como por uma grande variedade de métodos imunológicos. Embora esses últimos sejam efetivos, dois grandes problemas, reação cruzada com outros agentes micóticos e complexidade dos antígenos utilizados, impedem a padronização desses procedimentos. Para superar essa falta de reprodutibilidade, ferramentas de biologia molecular foram utilizadas para produzir um antígeno recombinante, de aproximadamente 40kDa de peso molecular, desse fungo. Esse antígeno foi identificado por Góes e colaboradores (2005), através da estratégia da produção de ASTs, tendo sido caracterizado como uma proteína que apresentou homologia com a calcineurina B de Neurospora crassa. Essa proteína foi clonada em vetor pGEX4T-3 e expressa em sistema procarioto, apresentando-se como uma proteína de 378 aminoácidos e aproximadamente 40kDa, sendo denominada pb40r. Essa proteína possui dois motivos mão-EF de ligação ao cálcio e apresenta homologia com a EF-HAND domain protein de Neosartorya fischeri e de Aspergillus clavatus. Testes de ELISA utilizando soros de camundongos imunizados com a proteína recombinante demonstraram que a mesma é imunogênica, sendo capaz de induzir significativa produção de anticorpos IgG, IgG1 e IgG2a. Além disso, camundongos infectados com P. brasiliensis também responderam a testes de ELISA, demonstrando a produção de IgG, IgG1 e IgG2a anti-pb40r. Uma bateria de 149 amostras de soro humano, consistindo de 72 de pacientes com PCM de diversas formas clínicas, 61 de pacientes com infecções diversas e 16 de indivíduos aparentemente saudáveis, foram testados por ELISA com a proteína recombinante, pb40r, purificada. A sensitividade e a especificidade da proteína em distinguir indivíduos sem infecção aparente de indivíduos com PCM de diversas formas clínicas foram de 90,3% e 81,25%, respectivamente. Já a especificidade desse antígeno frente a soros de indivíduos com outras infecções foi de 81,96%. Taxa significativa de reatividade cruzada foi observada com soros de pacientes com leishmaniose. Os resultados obtidos no presente trabalho demonstram que a proteína recombinante pb40r é um antígeno promissor, como alvo para imunodiagnóstico da PCM.