Padronização e aplicação de uma reação em cadeia da polimerase espécie-específica para diferenciação entre as espécies Ascaris lumbricoides e Ascaris suum

• Autor(a) principal: Talita Rodrigues dos Santos
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/37736
• topic: Ascaris; Genotipagem; Técnicas moleculares; PCR espécie-específica; Zoonose; Parasitologia; Ascaris; Técnicas de Genotipagem; Reação e m Cadeia da Polimerase; Técnicas de Diagnóstico Molecular; Zoonoses

Ascaris lumbricoides e A. suum são descritos como as espécies de Ascaris que infectam seres humanos e suínos, respectivamente. Estima-se que cerca de 447 milhões de pessoas estejam infectadas por A. lumbricoides, sendo predominantes em crianças residentes nos países em desenvolvimento, caracterizando um sério problema econômico e de saúde pública nos países afetados. No entanto, existe um número crescente de casos de ascaridíase humana, mesmo em países cujos índices para esta parasitose eram baixos ou mesmo nulos. Nessas localidades, os suínos têm sido incriminados como a principal fonte de infecção para humanos. Apesar das formas adultas de ambas as espécies apresentarem diferenças morfológicas sutis, a obtenção não é trivial. Além disso, os exames parasitológicos, comumente usados na prática clínica, são incapazes de diferenciar espécies de Ascaris a partir dos ovos encontrados nas fezes. Todavia, técnicas moleculares têm sido propostas para realizar tal diferenciação. Por conseguinte, o presente trabalho teve como objetivo a padronização e aplicação de um ensaio da Reação em cadeia da polimerase (PCR) espécie-específica, baseada na metodologia PCR alelo-específico (AS-PCR), tendo como alvo molecular o Espaço Transcrito Interno 1 (ITS-1) do DNA ribossomal para varredura e identificação das espécies A. lumbricoides e A. suum a partir do ovo. Os controles positivos foram sintetizados por meio de PCR convencional e clonagem para padronização da técnica e uso nas reações. Foram obtidas amostras de fezes positivas de 68 pacientes de sete estados brasileiros para identificação das espécies. Amostras de fezes de seis suínos de duas propriedades de Minas Gerais também foram utilizadas como forma de validação da técnica. Após os processos de recuperação e incubação dos ovos de Ascaris, o DNA de ovo único foi utilizado nas PCR espécie-específica. Após as reações, todas as amostras obtidas de humanos foram genotipadas como A. lumbricoides e todas as amostras obtidas de suínos foram genotipadas como A. suum. Uma porcentagem (2,9%) dessas amostras foram sequenciadas para validação da técnica. Os resultados encontrados foram condizentes com a literatura vigente, a qual demonstra que em regiões endêmicas os ciclos de transmissão são separados, apesar de ser assumida a presença de um fluxo gênico limitado entre as espécies. Dessa forma, a execução desse trabalho possibilitou a padronização de uma metodologia útil para o diagnóstico diferencial das espécies, contribuindo para a caracterização do real perfil epidemiológico da ascaridíase humana e suína no Brasil. Os dados aqui apresentados podem auxiliar na implementação de futuras estratégias de controle.