Envolvimento da proteína neuronal sensora de cálcio-1 (NCS-1) na sinalização muscarínica em células PC12

• Autor(a) principal: Melissa Monteiro Guimaraes
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9R6HWA
• topic: Sinalização de cálcio; Proteínas sensoras de cálcio neuronal; Células PC12; Transdução de sinal; Ácido glutamico; Células Cultura e meios de cultura; Farmacologia; Receptores muscarínicos/metabolismo; Sinalização do cálcio; Proteínas sensoras de cálcio neuronal; celulas PC 12; Transdução de sinal/fisiologia

A proteína Neuronal Sensora de Cálcio-1 (NCS-1) pertence à superfamília de proteínas apresentando domínios EF-hand com afinidade ao Ca2+. É expressa em neurônios e células neuroendócrinas onde modula a transmissão sináptica e plasticidade celular. Trabalhos descritos mostraram aumento da expressão da proteína NCS-1 no córtex pre-frontal de pacientes esquizofrênicos a partir de análises pós-morte sugerindo o envolvimento de NCS-1 nos mecanismos moleculares de regulação da transmissão dopaminérgica associados aos transtornos mentais. Entretanto, pouco se sabe a respeito da participação de NCS-1 na regulação da via de sinalização muscarínica. Neste trabalho foram verificados efeitos da superexpressão da NCS-1 em células PC12 (PC12- NCS-1) nos processos de liberação de glutamato, níveis de Ca2+ e dinâmica de fosfoinositídeos provocados pela ativação da via muscarínica. Foi observado que o estímulo com carbacol (CCH) (300mM) induziu liberação de glutamato tanto nas células PC12 selvagens (PC12-wt) quanto nas células PC12-NCS-1. Entretanto a liberação de glutamato foi maior nas células PC12-NCS-1 em comparação às células PC12-wt respectivamente (14.4 ± 1.8 e 8.3 ± 0.9 nmol/mg de proteína). Níveis aumentados de glutamato liberado pelas células PC12-NCS-1 estimuladas com CCH foram observados tanto na presença quanto na ausência do influxo de Ca2+. Além disso, níveis aumentados de InsP3 (663,0 ± 63,0 e 310.0 ± 39.0 % de fluorescência em U.A. ± EPM) e na [Ca2+]i (766.35 ± 35.0 e 687.8 ± 37.0 em nM ± EPM) foram observados nas células PC12-NCS-1 em comparação às células PC12-wt estimuladas com CCH (300mM) respectivamente. Padrões distintos na dinâmica intracelular de Ca2+ foram observados após o estímulo das células com CCH. Nas células PC12-NCS-1 foi observado um aumento na [Ca2+]i seguido de um decaimento rápido. Nas células PC12-wt foi observado um decaimento lento na [Ca2+]i característico de um platô. Tanto o aumento na formação de InsP3 quanto na liberação de glutamato foram bloqueados pela atropina (10mM) nas células PC12-NCS-1 estimuladas com CCH. Esses resultados indicam que o aumento da expressão de NCS-1 nas células PC12 induz facilitação da dinâmica de formação de segundos mensageiros e da liberação de glutamato dependente da ativação muscarínica. Essas evidências sugerem que a proteína NCS-1 poderia estar envolvida na amplificação de processos adaptativos da sinalização muscarínica associados a patofisiologia dos transtornos neurais.