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Carlos Renato Machadohttp://lattes.cnpq.br/6306925202374274Élida Mara Leite RabeloLuis Fernando Viana FurtadoMaurício Roberto Viana Sant'AnnaMaria Raquel Santos Carvalhohttp://lattes.cnpq.br/0218313120564770Valéria Nayara Gomes Mendes de Oliveira2020-07-01T20:09:36Z2020-07-01T20:09:36Z2020-02-27http://hdl.handle.net/1843/33727Geo-helmintoses humanas podem ser causadas, principalmente, por quatro espécies de nematódeos gastrointestinais, Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Necator americanus e Ancylostoma duodenale. A quimioterapia preventiva é recomendada pela Organização Mundial de Saúde como a principal estratégia para controle das infecções causadas por nematódeos em humanos e tem como objetivo eliminar a morbidade associada a essas infecções. Tal estratégia consiste na administração periódica de anti-helmínticos. Os fármacos albendazol e mebendazol são os mais comumente usados devido ao seu amplo espectro de atividade, baixo custo e facilidade de administração. Embora esses fármacos sejam eficazes, diminuindo a intensidade das infecções, eles têm o potencial de exercer uma pressão de seleção que pode resultar no estabelecimento de resistência. Entre os nematódeos de importância veterinária há comprovações de que o uso constante de benzimidazóis tem selecionado populações de parasitos resistentes. Existem evidências na literatura de resistência a estes fármacos em nematódeos que infectam humanos, principalmente para a espécie T. trichiura. A ocorrência de Polimorfismo de Nucleotídeo Único (SNP) dentro de três códons específicos, 167, 198 e 200 do gene da β-tubulina, são associados ao mecanismo de resistência aos benzimidazóis em nematódeos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi padronizar e validar uma metodologia para a detecção de polimorfismos associados ao processo de resistência aos benzimidazóis em T. trichiura. Controle não mutado e controles mutados foram construídos por meio de PCR convencional e pela técnica de mutagênese sítio dirigida, respectivamente. A metodologia ARMS-PCR foi estabelecida com sucesso para avaliação dos códons 167, 198 e 200 do gene da β-tubulina. Inicialmente foram analisadas 462 amostras a partir de ovos individuais obtidos de 37 pacientes de cinco estados brasileiros. A mutação no códon 198 foi observada em uma frequência de 4,8% (20/462), enquanto para os outros dois códons nenhum polimorfismo foi observado. Um total de 20 amostras foram submetidas a sequenciamento para validação da técnica padronizada. Conclui-se que há frequência moderada da mutação no códon 198 do gene da β-tubulina na população de T. trichiura analisada. Esse é o primeiro relato da presença dessa mutação em populações dessa espécie no Brasil, tal fato e a emergência já observada do problema em outras espécies reforça a necessidade de monitoramento regular de SNPs relacionados à resistência aos benzimidazóis com técnicas que sejam altamente sensíveis e especificas.Human geo-helminthiasis can be caused, mainly, by four species of gastrointestinal nematodes, Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Necator americanus and Ancylostoma duodenale. Preventive chemotherapy is recommended by World Health Organization as the main strategy to control infections caused by nematodes in humans and aims to eliminate the morbidity associated with these infections. Such a strategy consists of the periodic administration of anthelmintics. The drugs albendazole and mebendazole are the most commonly used due to their broad spectrum of activity, low cost and ease of administration. Although these drugs are effective, decreasing the intensity of infections, they have the potential to exert a selection pressure that can result in the establishment of resistance. Among nematodes of veterinary importance there is evidence that the constant use of benzimidazoles has selected populations of resistant parasites. There is evidence in the literature of resistance to these drugs in nematodes that infect humans, mainly for the species T. trichiura. The occurrence of Single Nucleotide Polymorphism (SNP) within three specific codons, 167, 198 and 200 of the β-tubulin gene, are associated with the mechanism of resistance to benzimidazoles in nematodes. Therefore, the objective of this work was to standardize and validate a methodology for the detection of polymorphisms associated with the process of resistance to benzimidazoles in T. trichiura. Non-mutated and mutated controls were constructed using conventional PCR and site-directed mutagenesis, respectively. The ARMS-PCR methodology was successfully established to evaluate codons 167, 198 and 200 of the β-tubulin gene. Initially, 462 samples were analyzed from individual eggs obtained from 37 patients from five Brazilian states. The codon 198 mutation was observed at a frequency of 4.8% (20/462), while for the other two codons no polymorphism was observed. A total of 20 samples were submitted to sequencing for validation of the standardized technique. It is concluded that there is a moderate frequency of mutation in codon 198 of the β-tubulin gene in the population of T. trichiura analyzed. This is the first report of the presence of this mutation in populations of this species in Brazil, this fact and the already observed emergence of the problem in other species reinforces the need for regular monitoring of SNPs related to benzimidazole resistance with techniques that are highly sensitive and specific.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em GenéticaUFMGBrasilICB - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLOGICASGenéticaTrichurisBenzimidazóisResistência a medicamentosTubulina (Proteína)Trichuris trichiuraResistênciaBenzimidazóisβ-tubulinaPadronização e validação de uma metodologia para detecção de polimorfismos associados ao processo de resistência aos benzimidazóis em Trichuris trichiurainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALPADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO DE UMA METODOLOGIA PARA DETECÇÃO DE POLIMORFISMOS ASSOCIADOS AO PROCESSO DE RESISTÊNCIA AOS BENZIMIDAZÓIS EM Trichuris trichiura.pdfPADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO DE UMA METODOLOGIA PARA DETECÇÃO DE POLIMORFISMOS ASSOCIADOS AO PROCESSO DE RESISTÊNCIA AOS BENZIMIDAZÓIS EM Trichuris trichiura.pdfapplication/pdf2472574https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/33727/1/PADRONIZA%c3%87%c3%83O%20E%20VALIDA%c3%87%c3%83O%20DE%20UMA%20METODOLOGIA%20PARA%20DETEC%c3%87%c3%83O%20DE%20POLIMORFISMOS%20ASSOCIADOS%20AO%20PROCESSO%20DE%20RESIST%c3%8aNCIA%20AOS%20BENZIMIDAZ%c3%93IS%20EM%20Trichuris%20trichiura.pdf4c24d0ffe7c27350af06f000d5fe5bffMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82119https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/33727/2/license.txt34badce4be7e31e3adb4575ae96af679MD521843/337272020-07-01 17:09:36.192oai:repositorio.ufmg.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2020-07-01T20:09:36Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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