Avaliação da ativação de apoptose e autofagia como mecanismo de citotoxicidade induzida por um nitrocomposto e uma hidrazona em células tumorais humanas

• Autor(a) principal: Gabriele de Matos Cardoso Perdigão
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/35691
• topic: Atividade citotóxica; Apoptose; Hidrazona; Nitrocomposto; Farmacologia; Apoptose; Fármacos; Nitrocompostos

A busca por novos fármacos antitumorais é uma necessidade principalmente devido aos tratamentos atuais apresentarem alta toxicidade, baixa efetividade e aparecimento de resistência em alguns tipos de cânceres. No processo de descoberta de fármacos, compostos de diferentes classes químicas são avaliados em modelos preditivos para seleção dos mais ativos. Estes são submetidos a melhoramento químico e estudos da relação estrutura-atividade (REA) para obtenção dos candidatos mais promissores. Neste trabalho, realizamos uma investigação do potencial antitumoral e elucidação do mecanismo de ação de duas substâncias: uma hidrazona (E6) e um nitrocomposto (EBAC). Essas substâncias demonstraram baixa toxicidade em modelos de células normais como Vero e de sangue periférico humano (PBMC). A avaliação do mecanismo de ação foi realizada na linhagem humana leucêmica (HL60) através de cinética de tempo por microscopia de contraste de fase e liberação de LDH, sendo possível verificar que as células HL60 apresentavam aspectos compatíveis com apoptose após tratamento com as duas substâncias. Fragmentação de DNA foi confirmada após 24 horas de tratamento por citometria de fluxo com marcação com PI, análise em gel de agarose e por observação dos núcleos após marcação com Hoescht 33342. Ensaios com inibidor de caspases Z-VAD-FMK, Anexina V e PI, quantificação de espécies reativas de oxigênio, ativação de caspase-3 confirmaram morte por apoptose induzida pelas duas substâncias.Perda do potencial de membrana mitocondrial e detecção de caspase -9 sugerem apoptose por meio de ativação da via mitocondrial nessa linhagem leucêmica. Diferenças no mecanismo de morte foram observadas para a EBAC que induziu acúmulo de vacúolos autofágicos após análise com alaranjado de acridina e aumento da quantidade de células viáveis após utilização do inibidor de autofagia Bafilomicina A1. Estes resultados são sugestivos de que EBAC induziu autofagia e apoptose simultaneamente, o que não foi observado para E6. Os resultados em conjunto demonstram que as substâncias EBAC e E6 são substâncias promissoras com potencial antitumoral e se justifica a continuidade de estudos de relação estrutura-atividade para obtenção de derivados mais ativos.