Desenvolvimento de candidatos vacinais contra o vírus zika utilizando a proteína do envelope viral, recombinante, funcionalizada ou não em nanobastões de ouro

• Autor(a) principal: Thaís de Fátima Silva Moraes
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/55543
• topic: vírus Zika; vacina de subunidade; nanobiotecnologia; nanobastões de ouro; Microbiologia; Zika virus; Vacinas de subunidades; Nanotecnologia

Por décadas, as infecções causadas pelo vírus Zika (ZIKV) foram negligenciadas em função de seus sintomas leves e número limitado de casos. Nos últimos anos, a rápida disseminação do ZIKV e sua ligação inesperada com a síndrome congênita do Zika e a síndrome de Guillain Barré transformaram o vírus em um problema emergente de saúde pública de interesse global, para o qual não há vacina disponível. Dentre as áreas que se apresentam de forma atrativa e com grande potencial de utilização no desenvolvimento de plataformas vacinais eficientes, a nanotecnologia tem ganho destaque, principalmente as nanopartículas de ouro. Suas propriedades ópticas e químicas únicas permitem sua ligação a moléculas orgânicas, como proteínas, incluindo seu uso como carreadores vacinais. No presente trabalho, mostramos a expressão heteróloga e purificação da proteína do envelope do ZIKV (ZIKV-E), a funcionalização de nanobastões de ouro comerciais (Nanopartz) com a proteína ZIKV-E e a caracterização da vacina experimental produzida. Finalmente, avaliamos a resposta imune celular e humoral gerada após a imunização de camundongos BALB/c com a proteína produzida e com os nanobastões de ouro ligados à proteína, cada qual combinado com os adjuvantes vacinais monofosforil A lipídio (análogo de LPS) e 7DW8-5 (análogo α-GalCer) e também com alúmen. Para isso, produzimos em E. coli BL21 e purificamos uma versão recombinante da proteína E de ZIKV (ZIKV-E) truncada em sua porção C-terminal. A proteína purificada foi reconhecida por anticorpos Anti-His e Panflavi 4G2 em ensaios de western-blot. Na sequência, os nanobastões de ouro foram funcionalizados com a proteína recombinante produzida e a ferramenta caracterizada por espectroscopia UV/Vis, avaliação do potencial zeta, avaliação do raio hidrodinâmico e fluorometria, confirmando a ligação da proteína à superfície dos nanobastões de ouro. Após a imunização dos camundongos com as vacinas experimentais, foram detectados altos níveis de anticorpos neutralizantes anti-ZIKV. Além disso, as vacinas experimentais se mostraram capazes de induzir a ativação de células do sistema imune dos animais imunizados com atividade polifuncional de secreção de importantes citocinas em um contexto de infecção viral e ativação de células de memória. Observamos aumento do IFN-γ secretado por linfócitos TCD4+ e TCD8+ no grupo imunizado com a vacina experimental completa, além disso, avaliamos a presença do marcador CD127, em populações com fenótipos de memória efetora (CD44+) e central (CD44+CD62L+). Juntos, nossos resultados são significativos e o imunógeno promissor para novos ensaios. Os próximos passos deste trabalho incluem avaliar a proteção desta vacina experimental frente a um desafio com ZIKV.