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Walderez Ornelas DutraRicardo GoncalvesRicardo Toshio FujiwaraLuisa Mourao Dias Magalhaes2019-08-11T12:42:35Z2019-08-11T12:42:35Z2013-03-13http://hdl.handle.net/1843/BUOS-979G5LDe acordo com a Organização Mundial de Saúde, existem cerca de 10 milhões de pessoas infectadas pelo Trypanosoma cruzi em todo o mundo sendo, a sua maioria, na América Latina e mais de 25 milhões de pessoas em risco de infecção. T. cruzi é classificado atualmente em seis DTUs, chamados de Tc I a VI, de acordo com Zingales (2009).Nossa hipótese é que cepas distintas infectam diferentemente monócitos humanos, causando alterações imunológicas distintas nestas células e em linfócitos. Assim, o projeto avaliou a infectividade do clone Colombiana 1.7 e da cepa Y pertencentes, respectivamente, aos grupos T. cruzi I e II, e o perfil imunológico induzido por elas na célula hospedeira. Para realização das analises, as cepas foram mantidas em cultura de células VERO em estufa úmida a 37ºC e 5% de CO2. O parasito foi corado com CFSE e então foi realizada a infecção de células do sangue periférico de doadores não chagásicos por 3 e 72 horas. Após este período, as hemácias foram lisadas e as células incubadas com anticorpos monoclonais dirigidos contra moléculas marcadoras de ativação, co-estimulatórias, citotoxicidade e citocinas (anti-CD14, CD16, CD4, CD8, TLR2, TLR4, CD80, CD86, HLA-DR, CD28, CTLA-4, CD69, IL-12, IL-10, IL-17, TNF, IFN e Granzima A). Os dados foram obtidos por citometria de fluxo e a análise dos mesmos realizada utilizando o software Flow-Jo. Nossos resultados demonstram que, apesar de não ter sido observada uma diferença na proporção de células CD14+CFSE+ quando a infecção foi realizada pela cepa Y ou pelo clone Colombiana 1.7, foram observadas diferenças na ativação de monócitos após a infecção pelas diferentes cepas. Quando a infecção foi realizada pela cepa Y observou-se maior ativação da subpopulação de monócitos CD16-, enquanto quando a infecção foi realizada pelo clone Colombiana 1.7 a subpopulação CD16+ foi a mais ativada. Foi observado também uma menor expressão de IL-10 por monócitos CFSE+ após a infecção pela cepa Y comparada com a infecção pelo clone Colombiana 1.7. Finalmente, foi possível diagnosticar um ambiente mais inflamatório após a infecção pela cepa Y do que após a infecção pelo clone Colombiana 1.7, ao estudar a razão entre as citocinas TNF e IL-10. Foi observada também uma diminuição da expressão de CTLA-4 em células T CD8+ após 72 horas de infecção pelas duas cepas. Em resumo, nossos resultados mostraram que a infecção com as diferentes cepas do T. cruzi leva a alterações fenotípicas e funcionais em monócitos e linfócitos humanos. Estes achados são importantes pois oferecem informações relevantes para o conhecimento da resposta immune desencadeada por diferentes cepas, podendo auxiliar na compreensão da doença e abrir perspectivas para novos métodos de controle.According to the World Health Organization, there are about 10 million people infected with Trypanosoma cruzi worldwide, mostly in Latin America, and more than 25 million people at risk of infection. T. cruzi is currently classified into six DTUs, called Tc I to VI according Zingales (2009). Our hypothesis is that different strains infect human monocytes differently, causing diferent immune changes in these cells and lymphocytes. Thus, the project assessed the infectivity of clone Colombiana 1.7 and the Y strain belonging respectively to groups T. cruzi I and II, and the immunological profile induced by them in the host cell. To perform the analyzsis, parasite strains were grown in VERO cells in incubators at 37 ° C and 5% CO2. Trypomastigote forms of the parasites were stained with CFSE and used in infection of peripheral blood cells from healthy donors for 3 and 72 hours. After this period, the red cells were lysed and the cells incubated with monoclonal antibody directed against activation markers, co-stimulatory and cytotoxicity molecules, and cytokines (anti-CD14, CD16, CD4, CD8, TLR2, TLR4, CD80, CD86, HLA- DR, CD28, CTLA-4, CD69, IL-12, IL-10, IL-17, TNFa, IFNg and granzyme A). Data were obtained by flow cytometry and analysis performed using the Flow-Jo software. Our results demonstrate that, despite no difference in the frequency of CFSE+ CD14+ cells when infection was performed by Y strain or clone Colombiana 1.7, differences were observed in the activation of monocytes after infection by different strains. When infection was carried out by Y strain, we observed higher activation of CD16- subpopulation of monocytes, whereas when infection was carried out by clone Colombiana 1.7, the CD16+ subpopulation was the most activated. It was also observed a reduced expression of IL-10 by CFSE+ monocytes after infection with strain Y compared to infection with clone Colombiana 1.7. Finally, it was possible to observe a more inflammatory environment after infection with strain Y than after infection Colombiana 1.7, by studying the ratio of the cytokines TNFa and IL-10. There was also a reduction of the expression of CTLA-4 in CD8+ T cells after 72 hours of infection by the two strains. In summary, our results showed that infection with different strains of T. cruzi leads to functional and phenotypic changes in human monocytes and lymphocytes. These findings are important because they provide information relevant to the understanding of the immune response triggered by different T. cruzi strains, which could aid in understanding the disease and open perspectives for new control methods.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGParasitologiaTripanossoma cruziPerfil imunológicoCepasPerfil imunológicoTrypanosoma cruziCepasAvaliação dos efeitos da infecção com diferentes cepas de Trypanosoma cruzi em características fenotípicas e funcionais de monócitos e linfócitos humanosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdissertac__a__o_lui__sa_magalha__es.pdfapplication/pdf3080846https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-979G5L/1/dissertac__a__o_lui__sa_magalha__es.pdf4c9490f10e9c8775ac78cbd636f371deMD51TEXTdissertac__a__o_lui__sa_magalha__es.pdf.txtdissertac__a__o_lui__sa_magalha__es.pdf.txtExtracted texttext/plain154848https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-979G5L/2/dissertac__a__o_lui__sa_magalha__es.pdf.txt6e42975328246b38aaabe710effa0ca9MD521843/BUOS-979G5L2019-11-14 03:57:24.226oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-979G5LRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T06:57:24Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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