Genes 16s RNA ribossomal e pld como marcadores moleculares para identificação genotípica de amostras clínicas de Corynebacterium spp.

• Autor(a) principal: Alessandra Rejane Ericsson de Oliveira Xavier
• Data de Publicação: 2016
• Outros Autores: Angélica Alves de Moura Freitas, Anna Christina de Almeida, Vasco Ariston de Carvalho Azevedo, Igor Viana Brandi
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/42505; https://orcid.org/ 0000-0001-9836-4117; https://orcid.org/0000-0001-6714-7996
• topic: Linfadenite caseosa; Fosfolipases

A caracterização genética das espécies é essencial quando se deseja eleger uma estirpe vacinal ou controlar a propagação de focos de uma doença em uma região. O 16S rRNA e genes que codificam phospolipase D (PLD) de Corynebacterium pseudotuberculosis desempenham um papel importante como marcadores para identificação de genótipo bacteriano. O objetivo deste estudo foi validar um “in house” metodologia molecular para identificação genética de Corynebacterium spp. isolado a partir de amostras clínicas mantidos em laboratório. Para este efeito, onze isolados foram reativados em caldo de infusão de cérebro e coração. As colônias cultivadas identificados como bacilos Gram-posi-tivas foram submetidas à extração do DNA cromossômico com kit KAPAExtract® de acordo com as recomendações do fabricante. O DNA cromossômico extraído foi quantificado por eletroforese em gel de agarose a 1,5% e, em seguida, submetidos a PCR duplex com os iniciadores específicos para o gênero e espécie de Corynebacterium pseudotuberculosis. Os produtos de amplificação gerados foram analisados por eletroforese em gel de agarose a 2,0%. Nenhum dos isolados amplificou os genes-al-vo para gênero e espécie específicos esperados para C. pseudotuberculosis. O controlo positivo, C. pseudotuberculosis CIP102968, teve os fragmentos de 813 e 201 pares de bases que correspondem aos 16S rRNA genes (gênero específico) e PLD (espécies específicas), respectivamente, amplificado. O controlo negativo, Escherichia coli ATCC 25922 não amplificado quaisquer genes alvo como espera-do. Os resultados mostraram a necessidade de melhoria nas técnicas de amostragem e identificação microbiológica anterior que antecede a etapa de identificação molecular e eles são extremamente im-portantes para a identificação do genótipo preciso de cepas de C. pseudotuberculosis.