Identificação e análise molecular de isolados de Leptospira spp. de bovinos em Minas Gerais

• Autor(a) principal: Maria Raquel Venturim Cosate
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-B2DJET
• topic: Leptospirose bovina; sequências de inserção; genótipo hardjoprajitno; sequenciamento genomico; lócus rfb; Ciência animal

A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial causada por bactérias classificadas no gênero Leptospira spp. Em bovinos é classificada como uma importante doença da reprodução associada com significativas perdas econômicas, especialmente em rebanho bovino leiteiro. Diante disso, este trabalho teve como objetivo realizar a classificação taxonômica de dois isolados bacterianos pertencentes ao gênero Leptospira spp mediante a caracterização sorológica e molecular das cepas bacterianas, assim como realizar a análise comparativa dos isolados regionais com cepas de referência diretamente associadas ao desenvolvimento da doença em humanos e cepas de importância veterinária. A classificação taxonômica do gênero Leptospira spp foi desenvolvida com a utilização de anticorpos monoclonais selecionados de acordo com histórico de prevalência da doença na região em estudo e aplicados na metodologia de microaglutinação para a determinação da classificação sorológica, na qual estão inclusos a caracterização de sorogrupo e sorovariedade. A microaglutinação indicou que os isolados denominados Lagoa e Bolívia pertencem ao sorogrupo Sejroe e sorovariedade Hardjo. A identificação da espécie das cepas em estudo foi realizada com a utilização de genes conservados, incluindo 16S rRNA ribossomal e secy, os quais confirmaram a classificação dos isolados na espécie Leptospira interrogans. No estudo comparativo das cepas regionais e de referência foram selecionados os genes ORF14, ORF15, ORF22, ORF36 localizados no lócus rfb, o qual é descrito estar associado a codificação de lipopolissacarídeos de membrana, genes associados a virulência do microrganismo, denominado LigB e elementos móveis do genoma, conhecidos como IS1533 e IS1500, com os quais foram realizadas quantificação do número de cópias distribuídas no genoma mediante aplicação da técnica de Real time PCR. As análises permitiram identificar diferenças significativas destes elementos móveis entre os isolados com idêntica classificação taxonômica. Também foram realizados sequenciamento parciais destes elementos, os quais sugeriram a ocorrência de transferência lateral entre cepas classificadas nas espécies Leptospira interrogans e Leptospira borgpetersenii pertencentes a sorovariedade Hardjo. A análise comparativa com o gene ORF22 permitiu a discriminação de cepas ao nível de sorogrupo e sorovariedade, enquanto a ORF36 mostrou-se única para cepas classificadas no genótipo hardjoprajitno. Por fim, o sequenciamento completo do genoma da cepa Norma permitiu a identificação diferenciada de genes associados à virulência entre cepas de Leptospira spp. Portanto, os ensaios desenvolvidos sugerem que estes genes podem contribuir na identificação, classificação e estudos moleculares epidemiológicos do gênero Leptospira spp.