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Carlos Delfin Chavez OlorteguiLiza Figueiredo Felicori VilelaStephanie Stransky Lauar2019-08-10T10:13:28Z2019-08-10T10:13:28Z2012-11-05http://hdl.handle.net/1843/BUOS-B3XPAUCanais para sódio voltagem dependentes (Nav) são canais iônicos responsáveis pela iniciação e propagação de potenciais de ação em células eletricamente excitáveis. Estes canais são expressos em células metastáticas de diversos tipos de câncer, e mutações associadas a eles estão relacionados à síndromes epilépticas, miopatias esqueléticas, arritmias cardíacas, neuropatias entre outras. Devido ao importante papel dos canais para Na+ em diferentes patologias, o objetivo deste estudo foi a produção de anticorpos contra uma sequência extracelular conservada das subfamílias Nav. A sequência de 15 aminoácidos (peptídeo alpha) correspondente ao 11º segmento extracelular localizado no domínio IV do canal Nav1.1, foi sintetizada utilizando o método FMOC. Camundongos Balb/C e coelhos New Zealand foram imunizados com o peptídeo sintético conjugado à ovalbumina. Anticorpos anti-peptídeo alpha foram testados quanto à capacidade de reconhecer tanto o próprio peptídeo alpha, através de ensaios de ELISA e SPOT, mas também de reconhecer o próprio canal para Na+, tanto em células HEK expressando o canal Nav1.3 e também em extrato de córtex de cérebro de camundongos. Os resultados demonstraram que o peptídeo sintetizado é capaz de induzir a produção de anticorpos sítio específicos. Além disso, nossa metodologia foi eficaz no mapeamento de um sítio extracelular do canal para Na+ e para a identificação de resíduos de aminoácidos críticos para a interação com o anticorpo, proporcionando novas perspectivas para o estudo da modulação de canais para Na+ e seus efeitos fisiopatológicos associadosVoltage-gated sodium channels (Nav) are ion channels responsible for the initiation and propagation of action potentials in electrically excitable cells. These channels are expressed in metastatic cells of several types of cancer, and mutations associated with them are related to epileptic syndromes, skeletal myopathy, cardiac arrhythmias, neuropathies and others. Due to the important role of Na+ channels in different pathologies, the aim of this study was the production of antibodies against a conserved extracellular sequence of the Nav subfamilies. The sequence of 15 amino acids (alpha peptide) corresponding to the 11º extracellular segment located in domain IV of Nav1.1 channel, was synthesized using the FMOC method. Balb/C mice and New Zealand rabbits were immunized with the synthetic peptide conjugated to ovalbumin. Alpha peptide antibodies were tested for their ability to recognize alpha peptide in an ELISA and SPOT assay, and also for their ability to recognize the Na+ channel in HEK cells expressing Nav1.3 channels and mouse brain cortex extract. The results showed that the synthesized peptide was capable of inducing the production of site specific antibodies. Moreover, our method was effective in mapping a Na+ channel extracellular site and in identification of critical amino acids residues for the interaction with the antibody, providing new prospects for studying modulation of sodium channel and their associated pathophysiological effectsUniversidade Federal de Minas GeraisUFMGAnticorposCanais de sódioNeurociênciasPeptídeosCanais para na+Peptídeo alphaSegmento extracelularAnticorpoGeração e caracterização molecular de anticorpos contra canais para sódio voltagem dependentesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdissertac_a_o_stephanie_stransky_lauar.pdfapplication/pdf7108404https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-B3XPAU/1/dissertac_a_o_stephanie_stransky_lauar.pdf8f212eb27649ecca003c409ab602ab85MD51TEXTdissertac_a_o_stephanie_stransky_lauar.pdf.txtdissertac_a_o_stephanie_stransky_lauar.pdf.txtExtracted texttext/plain130700https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-B3XPAU/2/dissertac_a_o_stephanie_stransky_lauar.pdf.txtd38b9b53126c09e5bc27a4670ffd522dMD521843/BUOS-B3XPAU2019-11-14 09:41:38.924oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-B3XPAURepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T12:41:38Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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