Diagnóstico parasitológico e molecular da doença de Chagas humana e tipagem do Trypanosoma cruzi recém-isolado de pacientes portadores de diferentes formas clínicas

• Autor(a) principal: Fabiana Caroline Zempulski Volpato
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9BVKP8
• topic: Parasitologia; Tripanossoma cruzi; Parasitologia; Chagas, Doença de; Diversidade genética; Reação em cadeia de polimerase

Neste trabalho foram avaliados dois métodos de diagnóstico, da doença de Chagas, a hemocultura e a reação em cadeia da polimerase (PCR), além do perfil genético das populações do Trypanosoma cruzi recém-isoladas de 91 pacientes chagásicos crônicos, não tratados, com formas clínicas definidas, indeterminada (n=23) e cardíaca (n=68). A positividade total da hemocultura foi de 54,95% e, quando relacionada à forma clínica foram positivos 60,29% dos pacientes com a forma cardíaca e 39,13% dos portadores da forma indeterminada. O T. cruzi foi detectado em 70,00% das hemoculturas entre 30-60 dias e 56,00% dos pacientes positivaram um ou dois tubos. A PCR detectou o kDNA do parasito em 98,90% dos pacientes e, em relação a forma clínica a positividade foi 100,00% nos pacientes cardíacos e 95,65% nos portadores da forma indeterminada. A associação dos métodos aumentou a positividade em 43,96%, uma vez que 54,95% dos pacientes foram positivos tanto pela PCR quanto pela hemocultura e 1,09% foram negativos em ambos os métodos. A variabilidade genética foi analisada em 36 isolados do T. cruzi procedentes de 29 pacientes chagásicos cardiopatas e sete portadores da forma indeterminada usando os marcadores moleculares: domínio divergente D7 do gene rDNA 24S, gene mitocondrial citocromo oxidase subunidade II (CO II) e região intergênica dos genes de miniexon (SL-IRac) e, 97,22% dos isolados do T. cruzi foram relacionados ao rDNA 1 e haplogrupo mitocondrial C associados a DTU II. Entretanto, um único isolado de paciente com a forma clínica indeterminada foi associado à DTU III ou DTU V pelo marcador rDNA 24s e a DTU I por CO II. A análise com o marcador dos genes SL-IRac confirmou que este isolado corresponde a DTU I. Os dados demonstraram que a hemocultura e a PCR foram eficientes com a coleta de apenas uma amostra de sangue e, quando associados aumentam à sensibilidade no diagnóstico da doença de Chagas crônica. A PCR é mais sensível para o diagnóstico, visto que, foi capaz de detectar o kDNA do parasito em pacientes negativos para a hemocultura. O perfil genético dos isolados do T. cruzi demonstrou que não foi possível estabelecer associação com as formas clínicas dos pacientes chagásicos.