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Lucas Antonio Miranda FerreiraRenata Barbosa de OliveiraMarta Marques Gontijo de AguiarAndre Augusto Gomes FaracoLeila Rodrigues Caldeira2019-08-11T21:07:08Z2019-08-11T21:07:08Z2011-12-16http://hdl.handle.net/1843/FARC-8QPFV5O tratamento das leishmanioses inclui a abordagem tópica ou sistêmica. A terapia parenteral convencional baseia-se na utilização de antimonias pentavalentes. A anfotericina B (AmB), fármaco de segunda escolha, pode ser utilizada quando o tratamento com os antimoniais não é indicado ou no caso de falha terapêutica. A estrutura química peculiar da AmB torna o fármaco praticamente insolúvel em água e na maioria dos solventes orgânicos. A formulação convencional da AmB é uma dispersão coloidal na qual o fármaco associa-se ao desoxicolato de sódio (AmB-D). Embora efetivo, o tratamento com essa formulação é acompanhado de toxicidade frequente. As formulações lipídicas comercialmente disponíveis surgem como forma de superar esse inconveniente. É conhecido que tais sistemas diminuem a toxicidade relacionada à AmB, porém seu alto custo e dificuldades de preparo em escala industrial impedem seu amplo uso. As nanoemulsões (NE) são uma alternativa atraente para carreamento de AmB, uma vez que são sistemas lipídicos, capazes de reduzir a toxicidade do fármaco, além de serem de baixo custo e fácil obtenção. A estratégia de incorporação da AmB nas NE sem o uso de solventes orgânicos faz uso do perfil de pH-solubilidade do fármaco. Este trabalho tem por objetivo desenvolver NE carregadas com AmB com e sem o lípide catiônico estearilamina (STE). A influência da STE sobre as características físico-químicas e biológicas das NE foi investigada. As NE foram preparadas pelo método de homogeneização a quente, utilizando sonda de ultrassom. O diâmetro médio dos glóbulos foi menor na presença de STE do que na sua ausência. O potencial zeta foi positivo e aumentou em função do teor de STE, contrastando com as formulações sem esse lípide, que apresentaram valores negativos de potencial zeta. A eficiência de encapsulação (EE) da AmB foi alta, independente da presença de STE. Estudos de estabilidade de NE carregadas com AmB, com e sem STE, indicaram que ambas as formulações são estáveis. Análises de dicroísmo circular mostraram que a AmB presente nas NE encontra-se predominantemente na forma monomérica, que é a forma menos tóxica para o hospedeiro e mais ativa contra células do parasita, em contraste com a formulação comercial AmB-D, na qual há uma grande proporção de fármaco livre na forma oligomérica. Os resultados dos estudos de citotoxicidade in vitro, por meio do ensaio de MTT em macrófagos da linhagem J774, indicaram que as NE carregadas com AmB sem STE e contendo STE 0,1% p/v são menos citotóxicas do que a formulação comercial AmB-D. Além disso, o aumento da concentração do lípide catiônico nas formulações induz aumento de citotoxicidade. Estudos de eficácia in vitro em macrófagos J774 infectados com Leishmania (Leishmania) amazonensis mostraram que a NE carregada com AmB com STE 0,1% p/v apresenta eficácia comparável à AmB-D. Embora a NE carregada com AmB sem STE tenha apresentado eficácia estatisticamente inferior à formulação convencional, essa redução não é expressiva, tendo em vista o ganho que tal formulação traz em termos de seletividade entre células do hospedeiro e do parasita, sendo, portanto, uma alternativa atrativa para o tratamento das leishmanioses.The treatment of leishmaniasis includes topical and systemic approach.The conventional parenteral therapy is based on the use of pentavalent antimonials. Amphotericin B (AmB), the second drug of choice, can be used when treatment with antimonials is not indicated or in the case of therapeutic failure. The particular chemical structure of AmB makes it practically insoluble in water and in most organic solvents. The conventional formulation of AmB is a colloidal dispersion in which the drug is associated with sodium deoxycholate (AmB-D). Although effective, treatment with this formulation is often accompanied by toxicity. The commercially available lipid formulations appear as a way to overcome this drawback. It is known that such systems reduce AmB-related toxicity, but its high cost and difficulty of manufacturing impede its widespread use. Nanoemulsions (NE) are attractive carriers of AmB, since they are lipid systems, which are able to reduce the drug-related toxicity, in addition to being inexpensive and easy to manufacture. The strategy of incorporation of AmB in the NE droplets, without organic solvents, makes use of the pH-solubility profile of the drug. This work aims to develop AmB-loaded NE with and without the cationic lipid stearylamine (STE). The influence of STE on the physico-chemical and biological properties of NE was investigated. The NE were prepared by hot homogenization method using ultrasound probe. The average diameter of the droplets was lower in the presence of STE than in its absence. The zeta potential was positive and increased as a function of STE content, in contrast to the formulations without this lipid, which showed negative zeta potential. The encapsulation efficiency (EE) of AmB was high despite the presence of STE. Stability studies of AmB-loaded NE, with and without STE, indicated that both formulations are stable. Analysis of circular dichroism showed that AmB present in NE is predominantly in monomeric form, which is the least toxic to the host cells and more active against the parasite, in contrast with commercial AmB-D, in which there is a large proportion of free drug in oligomeric form. The results of in vitro cytotoxicity studies, by MTT assay in J774 macrophage lineage, indicated that the NE loaded with AmB, without STE and 0.1 % w/v STE, are less cytotoxic than the commercial formulation AmB- D. In addition, increasing concentration of cationic lipid leads to an increase in cytotoxicity. In vitro efficacy studies in J774 macrophages infected with Leishmania (Leishmania) amazonensis showed that AmB loaded-NE with 0.1% w/v STE shows efficacy comparable to AmB-D. Although AmB loaded-NE without STE had shown statistically lower efficacy than the conventional formulation, this reduction is not significant in view of the gain that such a formulation brings in terms of selectivity between cells of the host and parasite, therefore, an attractive option for the treatment of leishmaniasis.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGLeishmanioseTecnologia farmaceuticaAnfotericina BNanotecnologiaFarmáciaNanoemulsõesLeishmaniosesEmulsões submicrônicasAnfotericina BEstearilaminaNanotecnologiaNanoemulsões carregadas com anfotericina B para o tratamento das leishmanioses: uma nova abordageminfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o_leila_rodrigues_caldeira.pdfapplication/pdf2692672https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/FARC-8QPFV5/1/disserta__o_leila_rodrigues_caldeira.pdf6a906bcbd4bff3e22e090217dd371e26MD51TEXTdisserta__o_leila_rodrigues_caldeira.pdf.txtdisserta__o_leila_rodrigues_caldeira.pdf.txtExtracted texttext/plain206805https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/FARC-8QPFV5/2/disserta__o_leila_rodrigues_caldeira.pdf.txt101364c1534f41bbb332315e7504bf4dMD521843/FARC-8QPFV52019-11-14 11:42:52.332oai:repositorio.ufmg.br:1843/FARC-8QPFV5Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T14:42:52Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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