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Marcelo Matos SantoroConsuelo Latorre Fortes-diasMarcelo Porto BemquererSuely Gomes de FigueiredoPaulo Sergio Lacerda BeiraoJonas Enrique Aguilar PeralesRoberta Marcia Marques dos Santos2019-08-13T09:56:01Z2019-08-13T09:56:01Z2005-08-22http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8A5FT5A crotoxina (Ctx) é o principal componente tóxico da peçonha da cascavel sulamericana Crotalus durissus terrificus. É um heterodímero composto por duas subunidades: CB, uma PLA2 tóxica, e CA, que não apresenta atividade enzimática nem neurotóxica. No plasma da cascavel está presente uma proteína, denominada CNF, para fator neutralizante de C. d. terrificus capaz de inibir a atividade enzimática e letal do veneno homólogo. A ação inibidora de CNF se deve a substituição de CA no complexo Ctx (CACB) formando um novo complexo estável CB/CNF. No presente estudo, uam nova metodologia para purificação de CNF foi desenvolvida. CNF está presente no plasma da serpente como uma mistura das formas glicosilada e deglicosilada. Foi demonstrado que a glicosilação não é necessária para sua atividade inibidora de PLA2. A interferência de CNF na ligação do complexo Ctx marcado radioativamente, formado por CA e uma isoforma de CB, CA-125ICB2, àsinaptossomas cérebro corticais de rato foi avaliada em diferentes condições. A competição por Ctx e CA não marcados foi feita em paralelo. CNF foi capaz de inibir a ligação da toxina aos sinptossomas em todas as condições testadas, incluindo o deslocamento de Ctx após a sua ligação à membrana sinaptossomal. O modelo de interação entre Ctx, o receptor e CNF, previamente proposto, foi aprimorado. Ossegmentos de peptídeos lineares, provavelmente envolvidos na interação entre as proteínas nos complexos de CA ou CNF com duas isoformas de CB (CB1 e CB2) foram determinados pela técnica se síntese multipla de peptídeos lineares. Esses segmentos foram identificados em um modelo tridimensional, proposto para asisoformas de CB, como possíveis sítios de interação linear.Crotoxi (Ctx) is the main toxic component of the venom of Crotalus durissus terrificus, the South American rattlesnake. Ctx is a heterodimer of CB, a neurotoxic phospholipase A2 (PLA2) and CA, which is devoid of any enzymatic or neurotoxic activity. The blood plasma of C. d. terrificus contains an endogenous inhibitor, named CNF for Crotalus neutralizing factor that is able to inhibit both lethal and enzymatic activities of the homologous venom. The biological action of CNF is due to the replacement of CA in Ctx complex (CACB) and formation of a new stablecomplex CNFCB. In the present work, a novel methodology for purification of active CNF from the crude snake plasma was developed. CNF in nature exists as a mixture of a glycosylated and a deglycosylated forms and the carbohydrate moiety was shown to be unnecessary for its inhibitory activity. The interference of CNF on the binding of radio iodinated Ctx, composed of CA and a single isoform of (CB CA-125ICB2), to rat brain synaptosomes was evaluated under different conditions. Competition by unlabeled Ctx and CA was run in parallel. CNF was able to inhibit the binding of Ctx to synaptosomes under all condition tested, including displacing the toxin already bound to its membrane target. A model of interaction between Ctx, target receptor and CNF, previously proposed, was updated. The linear peptide segments probably involved in the interaction between the proteins in the complexesof CA or CNF with two main isoforms of CB (CB1 and CB2) were mapped by spot multiple peptide syntesis. These segments were identified in a three-dimensional model proposed for the CB isoforms as possible linear interaction sites.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGBioquímicaBioquímicaCaracterização estrutural e funcional de um inibidor de PLA2 presente no plasma da cascavel sulamericana (Crotalus durissus terrificus)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALtese_final.pdfapplication/pdf759556https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-8A5FT5/1/tese_final.pdf82b53216d940992068ce294ad781a336MD51TEXTtese_final.pdf.txttese_final.pdf.txtExtracted texttext/plain170619https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-8A5FT5/2/tese_final.pdf.txt0c1e64c5e4fb8b32921633c9864447d5MD521843/BUBD-8A5FT52019-11-14 22:26:45.924oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-8A5FT5Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-15T01:26:45Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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