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Erika Cristina JorgeGerluza Aparecida Borges SilvaTania Mara SegatelliFernando Antônio Mauad de AbreuIria Gabriela Dias dos Santos2019-08-11T19:04:01Z2019-08-11T19:04:01Z2014-07-16http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AEPPD6O processo de odontogênese é guiado por uma cascata de sinalização na qual inúmeras moléculas, como os fatores de crescimento fibroblástico 2, 3 e 4 (FGF2, FGF3 e FGF4), garantem o desenvolvimento dos grupos dentários. A maioria dos dados sobre a odontogênese advém de roedores, que não possuem todos os grupos dentários. O gambá Didelphis albiventris é um mamífero marsupial com dentição mais próxima à humana. Além disso, a odontogênese nestaespécie ocorre nos neonatos já no marsúpio, facilitando o acesso e a coleta de amostras para o estudo da formação dos dentes. O objetivo deste estudo foi determinar o padrão de expressão de FGF2, FGF3 e FGF4 durante a odontogênese de D. albiventris. Para isso, neonatos de D. albiventris foram coletados e processados para seguintes análises: (1) histológica, para caracterizar morfologicamente a odontogênese de molares de D. albiventris; (2) de imunolocalização, para caracterizar o padrão de expressão de FGF2, FGF3 e FGF4 durante a odontogênesenesta espécie de gambá; e (3) de expressão gênica, para clonar e sequenciar essas moléculas de interesse no gambá, além de permitir a caracterização do padrão de expressão dos RNAm para FGFs, por hibridização in situ. A análise histológica foi realizada por coloração HE; e a imunolocalização dos FGFs foi realizada por imunoperoxidase indireta. Para a análise de expressão gênica, oligonucleotídeos foram construídos com base na sequência conhecida de Monodelphis domestica, o marsupial mais próximo com genoma sequenciado. Oligos foram desenhados para amplificar fragmentos de FGF3 e FGF4 (uma vez que FGF2 já havia sido sequenciado anteriormente). A sonda de RNA antisenso foi sintetizada in vitro, com marcação para digoxigenina. A análise histológica das fases da odontogênese mostrou que o gambá D. albiventris possui as mesmas estruturas presentes em roedores, nos mesmos estágios da odontogênese, além de apresentar uma lâmina dentária secundária vestigial. A imunohistoquímicapermitiu a observação de FGF2, FGF3 e FGF4 em um maior número de estruturas dentárias em relação à literatura referente a roedores, sugerindo um papel mais amplo dessas moléculas no gambá. Não foi possível amplificar FGF3 de D. albiventris, sugerindo diferenças nas sequências entre as espécies de gambás. O fragmento de FGF4 foi clonado e sequenciado. O clone também serviu como molde para a síntese da sonda de RNA antisenso, utilizada na hibridizaçãoin situ. O padrão de expressão indicou a presença de FGF4 no germe dentário, tecido conjuntivo, musculatura esquelética, cartilagem, epitélio, fígado e tecido nervoso. O conhecimento da sinalização que determina a odontogênese em um modelo animal com dentição completa pode contribuir para o desenvolvimento de terapias para a reposição de dentes perdidos. Este estudo ainda representa mais um passo no conhecimento dessa espécie de gambá e na sua implementação para estudos em Biologia do Desenvolvimento.Odontogenesis is guided by a complex signaling cascade in which several molecules, including the fibroblastic growth factors 2, 3 and 4 (FGF2, FGF3 and FGF4), ensure dental groups development and specificity. Most of the data on odontogenesis derives from rodents, which does not have all dental groups. Didelphis albiventris is a marsupial mammal with the closest dentition to humans. Besides, odontogenesis in this species occurs when the newborns arealready in the pouch, favouring samples harvesting for the study of tooth development. This study aimed to determinate the expression pattern of FGF2, FGF3 and FGF4 during the D. albiventris odontogenesis. For this, D. albiventris newborns were harvested and processed for the following analysis: (1) histological, to allow the morphological characterization of the D. albiventris molars odontogenesis; (2) immunolozalization, to establish FGF2, FGF3, and FGF4 expression pattern during odontogenesis; and (3) of gene expression, to allow the cloningand sequencing of these molecules in this opossum species, providing tools for the localtemporal characterization of the FGFs mRNA expression patterns, by in situ hybridization. Histological analysis was performed using HE; and FGFs immunolocalization was performedby indirect immunoperoxidase. For gene expression analysis, oligos were obtained based on sequences available for Monodelphis domestica, the closest marsupial with genome sequenced.Oligos were obtained to amplify D. albiventris FGF3 and FGF4 (as FGF2 was cloned and sequenced before). Antisense RNA probe were in vitro synthesized, using digoxigenin for labelling. Histological analysis of the odontogenesis stages showed similarity of dental structures between D. albiventris and rodents, at the same odontogenesis stages, in additionto the presence of a vestigial secondary dental lamina in opossum. Immunolocalization allowed the observation of FGF2, FGF3 and FGF4 in a larger number of dental structures than related data for rodents, suggesting broader functions for these molecules in this opossumspecies. It was not possible to amplify D. albiventris FGF3, suggesting differences in the sequence level between these two opossum species. A FGF4 fragment was cloned and sequenced. This clone was also used to allow the synthesis of an antisense RNA probe, for in situ hybridization. FGF4 trancripts were detected in the dental germ, connective tissue, skeletal muscle, cartilage, epithelium, liver, and nervous tissue. The knowledge of the signaling that determinates odontogenesis in an animal model with complete dentition may contribute to the development of therapies for the replacement of lost teeth. The present study representsUniversidade Federal de Minas GeraisUFMGOdontogêneseFatores de crescimento fibroblásticoBiologia celularBiologia do desenvolvimentoDentesDidelphis albiventrisBiologia CelularAnálise da expressão dos fatores de crescimento fibroblásticos 2, 3 e 4 durante a odontogênese de molares do gambá Didelphis albiventris, um modelo promissor para estudos em Biologia do Desenvolvimentoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o__ria_gabriela_dias_dos_santos.pdfapplication/pdf33940132https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-AEPPD6/1/disserta__o__ria_gabriela_dias_dos_santos.pdf53325e4bb35d94f6325abc58883d3a8cMD51TEXTdisserta__o__ria_gabriela_dias_dos_santos.pdf.txtdisserta__o__ria_gabriela_dias_dos_santos.pdf.txtExtracted texttext/plain211582https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-AEPPD6/2/disserta__o__ria_gabriela_dias_dos_santos.pdf.txt940a62a467fb9296892d6fdc99c3e687MD521843/BUBD-AEPPD62019-11-14 03:27:41.726oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-AEPPD6Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T06:27:41Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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