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Elziria de Aguiar NunanRoberto Goncalves JunqueiraJacqueline de SouzaAna Gabriela Reis Solano2019-08-12T21:47:23Z2019-08-12T21:47:23Z2008-11-28http://hdl.handle.net/1843/EMCO-7SMHYXA gramicidina é um pentadecapeptídeo linear antimicrobiano produzido pelo Bacilus brevis e ativo contra bactérias Gram positivo. O método microbiológico turbidimétrico é preconizado para o doseamento de gramicidina (USP 31 e BP 2007). Contudo, não se conseguiu reproduzir a metodologia farmacopéica em laboratório. Além disso, o método por difusão em ágar, uma outra alternativa para o doseamento, não é descrito para este antibiótico. Em vista do exposto, os objetivos deste trabalho foram desenvolver e validar os métodos microbiológicos, por difusão em ágar e turbidimétrico, para o doseamento da gramicidina. O método em placas foi desenvolvido empregando o ágar nutriente e Kocuria rhizophila ATCC 9341 como microrganismo teste. Foram utilizados dois delineamentos: retas paralelas 3x3 e 5x1. A validação do método demonstrou ser linear a relação entre o diâmetro dos halos de inibição e o logaritmo da concentração numa faixa de 5 a 25,3 g/ml. Os resultados obtidos por ambos os delineamentos foram precisos (desvio padrão relativo, DPR, para precisão intra-dia: 0,81 3x3; 1,90 5x1; DPR inter-dias: 1,35 3x3; 2,64 5x1), exatos (intervalo de tolerância a 95% dentro dos limites permitidos) e com veracidade adequada (erros sistemáticos não significativos). Além disso, o método foi seletivo com limites de detecção e quantificação inferior e superior iguais a 2,00; 5,00 e 25,3 g/ml, respectivamente. Não foi observada diferença entre a precisão dos delineamentos empregados no método de difusão em ágar (p>0,05). O método turbidimétrico utilizando caldo GCLT (formulação desenvolvida no laboratório) e Enterococcus hirae ATCC 10541 foi validado. Também foram empregados os delineamentos 3x3 e 5x1. A curva analítica demonstrou ser linear a relação entre a porcentagem de inibição do crescimento microbiano e a concentração de gramicidina no intervalo de 0,08 a 0,88 g/ml. Os resultados obtidos por ambos os delineamentos também foram precisos (DPR intra-dia: 0,18 3x3; 2,32 5x1; DPR inter-dias: 0,69 3x3; 2,47 5x1), exatos e com veracidade adequada. Os limites de detecção, de quantificação inferior e superior foram iguais a 0,06; 0,08 e 0,88 g/ml, respectivamente. Quando o delineamento 3x3 foi utilizado para o método turbidimétrico, resultados mais precisos foram obtidos. Foi verificada a inexistência de diferença significativa entre as precisões dos dois métodos quando o delineamento 3x3 foi empregado e nem quando o 5x1 foi utilizado.Gramicidin is a linear N-formylated pentadecapeptide-ethanolamide complex and active against Gram-positive organisms. It was first isolated from Bacillus brevis. The turbidimetric method is described in the United States Pharmacopoeia and British Pharmacopoeia to analyze gramicidin. Moreover, the results obtained in this assay were no satisfactory. The diffusion method is no described to analyze gramicidin. The present study reports the development and validation of the microbiological assays, applying the cylinder-plate and tube-assay, for the quantitation of gramicidin in raw material. The cylinder-plate method was developed using nutrient agar and a strain of Kocuria rhizophila ATCC 9341 as the test organism. The 3x3 and 5x1 experimental designs were applied. The validation of the method demonstrated that the method was precise (intra-assay: R.S.D. 0.81 3x3; 1.90 5x1; inter-assay: R.S.D. 1.35 3x3; 2.64 5x1), accurate (the 95% tolerance interval obtained was totally included within the acceptance limits) and selective. The calibration curve was linear from 5.00 to 25.3 g/ml. The detection, lower and upper quantification limit were 2.00; 5.00 and 25.3 g/ml, respectively. The F-test indicated that there is no significant difference between the two designs applied in the diffusion assay. The turbidimetric method was developed using GCLT broth (formulated in the laboratory) and Enterococcus hirae ATCC 10541 as the test organism. Also the 3x3 and 5x1 experimental designs were applied. The calibration curve was linear from 0.08 to 0.88 g/ml. The results obtained in this assay were precise (intra-assay: R.S.D. 0.18 3x3; 2.32 5x1; inter-assay: R.S.D. 0.69 3x3; 2.47 5x1) and accurate (the 95% tolerance interval obtained was totally included within the acceptance limits). The detection, lower and upper quantitation limit were 0.06; 0.08 and 0.88 g/ml, respectively. When turbidimetric assay was used, the 3x3 design was more precise than 5x1. The F-test indicated that there is no significant difference between the precision of two methods (p>0,05).Universidade Federal de Minas GeraisUFMGMedicamentos MicrobiologiaMedicamentos AvaliaçãoFarmáciaAntibióticosGramicidinaMétodo turbidimétricoMétodo por difusão em ágarDesenvolvimento de métodos microbiológicos para doseamento de gramicidina matéria-primainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o_final.pdfapplication/pdf2006148https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/EMCO-7SMHYX/1/disserta__o_final.pdfad778deee3f1b4360d2bc3c1a3e039c1MD51TEXTdisserta__o_final.pdf.txtdisserta__o_final.pdf.txtExtracted texttext/plain456034https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/EMCO-7SMHYX/2/disserta__o_final.pdf.txtea5caa4d26c452910538a5746d3e6c96MD521843/EMCO-7SMHYX2019-11-14 20:01:07.491oai:repositorio.ufmg.br:1843/EMCO-7SMHYXRepositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T23:01:07Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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