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Luiz Henrique Rosahttp://lattes.cnpq.br/3197093513022771Carlos Augusto RosaAristóteles Góes-NetoDaniel de Assis Santoshttp://lattes.cnpq.br/8867687199128048Mariana Costa Ferreira2022-05-24T14:40:20Z2022-05-24T14:40:20Z2013-02-18http://hdl.handle.net/1843/41929Os micro-organismos endofíticos, aqueles que residem assintomaticamente no interior dos tecidos vegetais, por pelo menos um período do seu ciclo de vida, são capazes de produzir diferentes metabólitos bioativos de interesse na medicina e agricultura. A espécie Carapa guianensis Aublet (Meliaceae), popularmente conhecida como Andiroba, é amplamente utilizada na medicina popular. Entretanto, apesar da sua ampla utilização etnobotânica, poucos estudos foram realizados com o objetivo de conhecer a comunidade de fungos endofíticos associados às folhas de C. guianensis. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi caracterizar a diversidade da comunidade de fungos endofíticos associados à C. guianensis e avaliá-la como fonte de metabólitos bioativos. Fragmentos das folhas foram desinfestados superficialmente e inoculados em meio de cultura Ágar Dextrose Batata (BDA) e Agar Extrato de Malte e Extrato de Levedura (YM) para isolamento dos fungos endofíticos. As placas foram incubadas por até 60 dias e os fungos obtidos isolados e purificados em BDA. Todos os fungos obtidos foram preservados e depositados na Coleção de Micro-organismos e Células da Universidade Federal de Minas Gerais. Após purificação foram obtidos 209 isolados de fungos filamentosos, os quais foram agrupados utilizando suas caracterísiticas morfológicas e moleculares em 42 morfoespécies. A identificação dos fungos foi realizada por meio do sequenciamento da região transcrita interna (ITS1-5.8S-ITS2) do gene do rRNA e sequenciamento parcial do gene da β-tubulina e/ou do Fator de elongação 1 alpha (EF-1α). Todos os táxons identificados foram classificados como pertencentes ao filo Ascomycota. A classe Sordariomycetes foi predominante, representando 91% dos táxons obtidos. As classes Dothideomycetes (6%) e Eurotiomycetes (3%) também foram encontradas. Dentro da classe dos Sordariomycetes foram encontradas espécies dos gêneros Colletotrichum, Diaporthe, Entonaema, Fusarium, Glomerella, Hypocrea, Menisporopsis, Pestalotiopsis, Phomopsis, Pilidiella e Xylaria. Entre os Dothideomycetes foram identificadas espécies dos gêneros Botryosphaeria, Endomelanconiopsis e Guignardia. Os gêneros pertencentes à classe Eurotiomycetes incluiram espécies de Aspergillus e Penicillium. Em comparação com outras comunidades de fungos endofíticos, a comunidade associada a C. guianensis apresentou elevada diversidade (Fisher-α = 17,23) e baixa dominância (Simpson = 0,93), indicando que os táxons encontrados estão distribuídos de forma homogênea dentro da comunidade. Por outro lado, a comunidade de fungos apresentou moderada riqueza de espécies (Margalef = 7,9). Todos os fungos endofíticos obtidos foram cultivados em BDA por 15 dias e seus metabólitos extraídos com etanol PA. Os extratos obtidos foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana e tripanosomicida pelo método de microdiluição em placa. Os extratos dos fungos Colletotrichum sp. UFMGCB 4991 e 4872, e Pilidiella cf. quercicola UFMGCB 4904 apresentaram atividade antibacteriana contra Escherichia coli com porcentagens de inibição de 95, 98 e 99% na concentração de 250 μg/mL, respectivamente. Os extratos dos fungos UFMGCB 4865, Endomelanconiopsis endophytica UFMGCB 4995 e Phomopsis sp. UFMGCB 4830 apresentaram atividade tripanosomicida a 20 μg/mL com percentual de inibição de 77,8, 85,9 e 100%, respectivamente. Entre os fungos que exibiram atividade antimicrobiana o isolado Colletotrichum sp. UFMGCB 4991 foi selecionado para realização de testes fermentativos, com o intuito de aperfeiçoar sua produção de metabólitos bioativos. Diferenças nutricionais (tipo de meio de cultura) e variação de temperatura e tempo de crescimento foram avaliadas, totalizando 64 diferentes condições de cultivo. Os extratos de Colletotrichum sp. UFMGCB 4991 foram submetidos à triagem contra todos os micro-organismos alvos. Entre as diferentes condições analisadas, 27 (42,18%) extratos apresentaram atividade contra pelo menos um dos micro-organismos alvos. Além disso, o extrato de Colletotrichum sp. UFMGCB 4991 que inicialmente foi capaz de inibir apenas Escherichia coli, após as variações nos parâmetros de cultivo, demostrou atividade contra Staphylococcus aureus, Candida albicans, Candida krusei e Cladosporium sphaerosperum. Os resultados obtidos no presente estudo contribuem para ampliar o conhecimento a respeito da comunidade de fungos endofíticos associados a plantas medicinais brasileiras. Apesar das folhas de C. guianensis não apresentarem um grande reservatório de fungos endofíticos promissores para estudos de bioprospecção, foi possível detectar duas espécies (Pilidiella cf. quercicola e Endomelanconiopsis endophytica) relatadas pela primeira vez como produtoras de metabólitos bioativos. Os extratos produzidos por estes fungos e aqueles obtidos por meio do teste fermentativo demonstraram-se promissores e estes podem conter moléculas protótipos para o desenvolvimento de novas drogas.Endophytic microorganisms, those that asymptomatically reside within the plant tissue for at least one period of its life cycle, are capable of producing different bioactive metabolites of interest in medicine and agriculture. The species Carapa guianensis Aublet (Meliaceae), popularly known as Andiroba, is widely used in folk medicine. However, despite its ethnobotany use, few studies have been conducted in order to know the community of endophytic fungi associated with leaves of C. guianensis. The objective of this study was to characterize the diversity of the community of endophytic fungi associated with C. guianensis and evaluate it as a source of bioactive metabolites. Fragments of leaves were superficially disinfected and inoculated in Potato Dextrose Agar culture (BDA), Malt Extract Agar and Yeast Extract (YM) for isolation of endophytic fungi. The plates were incubated for 60 days and the obtained fungi were isolated and purified in PDA. All fungi obtained were preserved and deposited in the Collection of Micro-organisms and cells of the Federal University of Minas Gerais. After purification, 209 isolates of filamentous fungi were obtained, which were grouped using morphological and molecular Its characteristics into 42 morphospecies. The identification of the fungi was performed by sequencing the internal transcribed region (ITS1, ITS2-5.8S) rRNA gene and partial sequencing of the gene for β-tubulin and / or elongation factor 1 alpha (EF-1α). All taxa identified were classified as belonging to the phylum Ascomycota. The class Sordariomycetes was predominant, representing 91% of taxa obtained. Classes Dothideomycetes (6%) and Eurotiomycetes (3%) were also found. In the class Sordariomycetes were found species of the genera Colletotrichum, Diaporthe, Entonaema, Fusarium, Glomerella, Hypocrea, Menisporopsis, Pestalotiopsis, Phomopsis, Pilidiella and Xylaria. Among Dothideomycetes were identified species of the genera Botryosphaeria, Endomelanconiopsis and Guignardia. The genera belonging to the class Eurotiomycetes included species of Aspergillus and Penicillium. In comparison to other communities of endophytic fungi, the community associated with C. guianensis showed high diversity (Fisher-α = 17.23) and low dominance (Simpson = 0.93), indicating that the taxa found are homogeneously distributed in the community. Moreover, the fungal community showed moderate species richness (Margalef = 7.9). All endophytes obtained were cultured in PDA for 15 days and had its metabolites extracted with ethanol PA. The extracts were evaluated for antimicrobial activity and trypanocidal method microdilution plate. Extracts of the fungus Colletotrichum sp. UFMGCB 4991 and 4872, and Pilidiella cf. quercicola UFMGCB 4904 showed antibacterial activity against Escherichia coli with percentages of inhibition of 95, 98 and 99% at a concentration of 250 mg/mL, respectively. The extracts of fungi UFMGCB 4865, Endomelanconiopsis endophytica UFMGCB 4995 and Phomopsis sp. UFMGCB 4830 showed trypanocidal activity at 20 mg/mL with inhibition percentage of 77.8, 85.9 and 100%, respectively. Among the fungi that exhibited antimicrobial activity, the isolate Colletotrichum sp. UFMGCB 4991 was selected for testing fermentation, in order to improve its production of bioactive metabolites. Nutritional differences (type of culture medium) and temperature variation and growth time were assessed, totaling 64 different growing conditions. Extracts of Colletotrichum sp. UFMGCB 4991 underwent screening against all micro-organisms targets. Among the different conditions analyzed, 27 (42.18%) extracts showed activity against at least one of the micro-organisms targets. Furthermore, the extract of Colletotrichum sp. UFMGCB 4991 that initially was only able to inhibit Escherichia coli, following variations in the parameters of cultivation, demonstrated activity against Staphylococcus aureus, Candida albicans, Candida krusei and Cladosporium sphaerosperum. The results obtained in this study contribute to the knowledge about the community of endophytic fungi associated with Brazilian medicinal plants. Although the leaves of C. guianensis not having a large reservoir of endophytic fungi promising for bioprospecting studies, it was possible to detect two species (Pilidiella cf. quercicola and Endomelanconiopsis endophytica) first reported as producers of bioactive metabolites. The extracts produced by these fungi and those obtained by the fermentation test proved to be promising, these molecules may contain prototype for the development of new drugs.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorOutra AgênciaporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em MicrobiologiaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIAhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessMicrobiologiaEndófitosMeliaceaeCompostos FitoquímicosMicrobiologiaDiversidade e bioprospecção de fungos endofíticos associados à Carapa guianensis Aublet (Andiroba)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALDissertação Mariana C. Ferreira.pdfDissertação Mariana C. Ferreira.pdfapplication/pdf2128916https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/41929/1/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20Mariana%20C.%20Ferreira.pdf999f045dcd8f43b1c27641f596a81779MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/41929/2/license_rdfcfd6801dba008cb6adbd9838b81582abMD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/41929/3/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD531843/419292022-05-24 11:40:20.599oai:repositorio.ufmg.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2022-05-24T14:40:20Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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