Caracterização e expressão heteróloga de proteínas de Corynebacterium pseudotuberculosis para a otimização de um teste intradérmico de hipersensibilidade para o diagnóstico da Linfadenite Caseosa

• Autor(a) principal: Renata de Faria Silva
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-96CK39
• topic: Corynebacterium pseudotuberculosis; Proteínas recombinantes; Intradérmico de Hipersensibilidade; Teste; Linfadenite Caseosa; Corynebacterium pseudotuberculosis; Linfadenite caseosa; Testes intradérmicos; Proteínas recombinantes; Genética

Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva que causa a Linfadenite Caseosa (LC), uma doença infecto-contagiosa crônica que acomete pequenos ruminantes, promovendo a redução da produtividade dos animais infectados. A doença se caracteriza pela formação de abscessos em nódulos linfáticos superficiais e/ou órgãos internos. Vários métodos para o diagnóstico da LC subclínica foram desenvolvidos, porém não alcançaram eficácia e praticidade satisfatórias. Assim, nesse trabalho selecionamos seis alvos protéicos dos 104 previamente descritos, caracterizamos os produtos gênicos das Open Reading Frame(ORFs) e produzimos as proteínas recombinantes para a otimização de um Teste Intradérmico de Hipersensibilidade (TIH) paraa LC. Os insertos das seis ORFs foram amplificados após a extração do DNA genômico da linhagem 1002 de C. pseudotuberculosiscom a utilização de iniciadores específicos, que ligados aos vetores pAE e pET-28a foram transformados em Escherichia coliDH5para a clonagem molecular. Para verificar a expressão das proteínas recombinantes, os clones foram transformados em E. coli C43 pLysSe a cinética de expressão realizada. Duas proteínasrecombinantes foram produzidas e submetidas a Western blotcom soros de caprinos infectados com C. pseudotuberculosis, demonstrando antigenicidade nesses testes preliminares. Novos testes de caracterização das proteínas recombinantes serão realizados e esperamos que as mesmas possam ser utilizadas na otimização de um TIH de elevada acurácia, para o controle da LC nos rebanhos de ovinos e caprinos.