Avaliação da expressão gênica de agonistas e antagonistas da via Wnt em células ex-vivo de fibroblastos do tipo sinoviócitos humanos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Tamiris de Paula Silva
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/42686
https://orcid.org/0000-0002-8570-8918
Resumo: INTRODUÇÃO: a via Wnt regula vários fenômenos e processos fisiológicos ao longo da vida humana incluindo o desenvolvimento ósseo. O metabolismo ósseo consiste em uma estabilidade entre a formação e a absorção do tecido. Quando esse equilíbrio é perdido as pessoas afetadas podem sofrer erosão ou osteoproliferação óssea. Atualmente para os pacientes com absorção óssea há vários medicamentos enquanto que para os pacientes com osteoproliferação óssea não há muitas opções eficazes. OBJETIVOS: analisar a expressão genética de agonistas e antagonistas da via Wnt de pacientes com artrite reumatoide- AR e espondiloartrites- EpAs (espondilite anquilosante e artrite psoriásica). METODOLOGIA: foram cultivados fibroblastos sinoviais de sete pacientes sendo quatro com artrite reumatoide e três com espondiloatrites (um com espondilite anquilosante e dois com artrite psoriásica) em meio de cultura DMEM com soro fetal bovino. Depois, dos fibroblastos foi extraído o mRNA, convertido em cDNA. Com o cDNA foi feito o RT-qPCR pelo método TAQMAN. RESULTADOS: Em todos os genes houve uma diferença de expressão entre os fibroblastos estimulados e os não estimulados, mas o resultado estatisticamente significativo foi o do gene WNT-9A. Com esse gene houve uma redução de expressão nos fibroblastos estimulados com IL-17, IL-22 e TNF-alfa nos pacientes com artrite reumatoide e com espondiloartrites. A maioria dos resultados desse estudo foram não estatisticamente significativas comprovando que a hipótese de que os estímulos alterariam a expressão gênica dos fibroblastos se tornou nula. CONCLUSÕES: Alguns fatores podem ter contribuído para esses resultados como baixo N amostral, estímulo com as citocinas, estímulo não completo em condições in vitro pois foram desconsideradas as interações entre os genes e entre os antagonistas e agonistas. Dessa forma a mais estudos se tornam necessários para que se possa confirmar ou não que os estímulos com as citocinas realmente não afetam a expressão dos genes antagonistas e agonistas que compõe a via Wnt. PALAVRAS CHAVE: proteínas Wnt, doenças reumáticas, doenças ósseas, expressão gênica.
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METODOLOGIA: foram cultivados fibroblastos sinoviais de sete pacientes sendo quatro com artrite reumatoide e três com espondiloatrites (um com espondilite anquilosante e dois com artrite psoriásica) em meio de cultura DMEM com soro fetal bovino. Depois, dos fibroblastos foi extraído o mRNA, convertido em cDNA. Com o cDNA foi feito o RT-qPCR pelo método TAQMAN. RESULTADOS: Em todos os genes houve uma diferença de expressão entre os fibroblastos estimulados e os não estimulados, mas o resultado estatisticamente significativo foi o do gene WNT-9A. Com esse gene houve uma redução de expressão nos fibroblastos estimulados com IL-17, IL-22 e TNF-alfa nos pacientes com artrite reumatoide e com espondiloartrites. A maioria dos resultados desse estudo foram não estatisticamente significativas comprovando que a hipótese de que os estímulos alterariam a expressão gênica dos fibroblastos se tornou nula. CONCLUSÕES: Alguns fatores podem ter contribuído para esses resultados como baixo N amostral, estímulo com as citocinas, estímulo não completo em condições in vitro pois foram desconsideradas as interações entre os genes e entre os antagonistas e agonistas. Dessa forma a mais estudos se tornam necessários para que se possa confirmar ou não que os estímulos com as citocinas realmente não afetam a expressão dos genes antagonistas e agonistas que compõe a via Wnt. PALAVRAS CHAVE: proteínas Wnt, doenças reumáticas, doenças ósseas, expressão gênica.INTRODUCTION: the Wnt pathway regulates various physiological phenomena and processes throughout human life including bone development. Bone metabolism consists of stability between tissue formation and absorption. When this balance is lost, affected people may experience erosion or bone proliferation. Currently, for patients with bone absorption have several medications available while for patients with bone proliferation there are not many effective drug options. OBJECTIVES: to analyze the gene expression of the Wnt pathway agonists and antagonists in patients with rheumatoid arthritis - RA and spondyloarthritis - SpAs (ankylosing spondylitis and psoriatic arthritis). METHODOLOGY: Synovial fibroblasts were grown from seven patients, four with rheumatoid arthritis and three with spondyloarthritis (one with ankylosing spondylitis and two with psoriatic arthritis) in DMEM culture medium with fetal bovine serum. Then, from the fibroblasts, the mRNA was extracted, converted into cDNA. RT-qPCR was performed using the cDNA using the TAQMAN method. RESULTS: In all genes, there was a difference in expression between stimulated and unstimulated fibroblasts, but the statistically significant result occurred with the WNT-9A gene. With this gene, there was a reduction in expression in fibroblasts stimulated with IL-17, IL-22 and TNF-alpha in patients with rheumatoid arthritis and spondyloarthritis. Most of the results of this study were not statistically significant, proving that the hypothesis that stimuli would alter the gene expression of fibroblasts has become null. CONCLUSIONS: Some factors may have contributed to these results, such as low N sample, stimulus with cytokines, non-complete stimulus in in vitro conditions because interactions between genes and between antagonists and agonists were disregarded. Thus, further studies are necessary to confirm or not that the stimuli with cytokines do not really affect the expression of the antagonist and agonist genes that make up the WNT pathway. KEY WORDS: Wnt proteins, rheumatic diseases, bone diseases, gene expression.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em Ciências Aplicadas à Saúde do AdultoUFMGBrasilMEDICINA - FACULDADE DE MEDICINAhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessProteínas WntDoenças reumáticasDoenças ósseasExpressão gênicaDissertação AcadêmicaProteínas WntDoenças reumáticasDoenças ósseasExpressão gênicaAvaliação da expressão gênica de agonistas e antagonistas da via Wnt em células ex-vivo de fibroblastos do tipo sinoviócitos humanosEvaluation of gene expression of agonists and antagonists of the Wnt pathway in ex-vivo cells of human synoviocyte-like fibroblastsinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALAvaliação da expressão gênica de agonistas e antagonistas da via Wnt em células do tipo fibroblastos sinoviócitos símile humanos..pdfAvaliação da expressão gênica de agonistas e antagonistas da via Wnt em células do tipo fibroblastos sinoviócitos símile humanos..pdfapplication/pdf1844906https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/42686/1/Avalia%c3%a7%c3%a3o%20da%20express%c3%a3o%20g%c3%aanica%20de%20agonistas%20e%20antagonistas%20da%20via%20Wnt%20em%20c%c3%a9lulas%20do%20tipo%20fibroblastos%20sinovi%c3%b3citos%20s%c3%admile%20humanos..pdf3320c1e82d7f9b508a1f93752df8714bMD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/42686/2/license_rdfcfd6801dba008cb6adbd9838b81582abMD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/42686/3/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD531843/426862022-06-27 08:33:29.405oai:repositorio.ufmg.br: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ório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2022-06-27T11:33:29Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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