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Carolina Cavaliéri Gomeshttp://lattes.cnpq.br/9793295296026544Vanessa de Fátima BernardesJean Nunes dos SantosFabrício Passador-SantosRennan Garcias MoreiraFelipe Paiva Fonsecahttp://lattes.cnpq.br/0656657393667582Bruna Pizziolo Coura2023-07-03T20:19:52Z2023-07-03T20:19:52Z2022-09-26http://hdl.handle.net/1843/55699Mutações patogênicas foram descritas em neoplasias benignas, incluindo tumores odontogênicos. No entanto, a patogênese molecular dos tumores odontogênicos mistos e do ameloblastoma adenoide (AA) não foi elucidada. Os tumores odontogênicos mistos apresentam proliferação tanto dos componentes epiteliais quanto ectomesenquimais. Esse grupo é composto pelo fibroma ameloblástico (FA), neoplasia benigna que muitas vezes é precursora do fibrossarcoma ameloblástico (FSA), pelo fibrodentinoma ameloblástico (FDA) e fibro-odontoma ameloblástico (FOA), cuja natureza e classificação ainda são motivo de debate, e pelos odontomas, hamartomas. O AA é uma neoplasia epitelial odontogênica recentemente reconhecida como entidade. Ele apresenta similaridade microscópica com outros tumores odontogênicos, incluindo o ameloblastoma, causado pela mutação BRAF p.V600E, e o tumor odontogênico adenomatoide, cuja assinatura molecular são mutações em KRAS. A análise da base genética das lesões supracitadas pode aprimorar o conhecimento acerca de sua patogênese molecular, auxiliando na definição de marcadores moleculares para fins de diagnóstico. Os cistos e tumores odontogênicos podem se originar do folículo dentário, que consiste em uma estrutura embrionária. Porém, pouco se sabe a respeito dos eventos moleculares relacionados à tumorigênese nesse contexto. Mutações patogênicas em genes supressores de tumor e oncogenes foram reportadas em tecidos normais. Assim, a análise molecular de folículo dentário poderia levar a uma melhor compreensão de mudanças ocorridas em estágios iniciais da tumorigênese, podendo auxiliar indiretamente na prevenção e diretamente na detecção tumoral em estágios iniciais. Portanto, os objetivos desse estudo foram: 1) investigar mutações hotspot em oncogenes e genes supressores de tumor em tumores odontogênicos mistos, 2) avaliar mutações patogênicas em KRAS e BRAF no AA e 3) investigar a presença das mutações em KRAS e BRAF em folículo dentário associados a dentes inclusos, uma vez que estas mutações ocorrem em uma grande proporção de ameloblastomas e tumor odontogênico adenomatoide. Para alcançar o primeiro objetivo, foi utilizado um cohort de descoberta de tumores odontogênicos mistos, sequenciados por Sequenciamento de Nova Geração (NGS) utilizando um painel de mutações hotspot em 50 oncogenes e genes supressores de tumor. A mutação BRAF p.V600E detectada foi confirmada por qPCR em tempo real alelo-específico e testada em um cohort de validação, que incluiu 28 tumores odontogênicos mistos, em que 22 foram submetidos à microdissecção e captura a laser, permitindo-se avaliar o status da mutação do componente epitelial e do componente mesenquimal separadamente. A mutação BRAF p.V600E foi detectada por NGS em 2/4 amostras do cohort de descoberta, e em 4/10 (40%) FA, 2/4 (50%) FDA, 2/6 (33%) FOA e 2/3 (67%) FSA da cohort de validação, encontrando-se restrita ao componente mesenquimal em 7/9 dos casos com mutação. Um caso de FSA apresentou uma área remanescente de FA, sendo ambos componentes mesenquimais (FSA e FA) positivos para a mutação. Os casos de odontoma (5/5) apresentaram status wild-type para a mutação BRAF. Para responder ao segundo e terceiro objetivos, as mutações hotspot BRAF p.V600E, KRAS p.G12V e p.G12R foram avaliadas em uma amostra de conveniência de 9 AA e 48 folículos dentários utilizando-se qPCR em tempo real alelo-específico. Todos os casos de AA (9/9) e de folículo dentário (48/48) apresentaram status wild-type para as mutações BRAF p.V600E e KRAS p.G12V/R. Os resultados permitem concluir que o FA, FDA, FOA e FSA apresentam mutações BRAF p.V600E em componentes mesenquimais e que ao menos um subgrupo dessas lesões é molecularmente distinto dos odontomas. O AA e folículos dentários não apresentam mutações BRAF p.V600E, KRAS p.G12V/R, e, se estas ocorrerem, deve ser em frequência muito baixa.Pathogenic mutations have been reported in several benign neoplasms, including odontogenic tumors. The molecular pathogenesis of mixed odontogenic tumors and adenoid ameloblastoma (AA) has not yet been elucidated. Mixed odontogenic tumors present epithelial and ectomesenchymal components proliferation. This group is composed by ameloblastic fibroma (AF), a benign neoplasm that is often a precursor of ameloblastic fibrosarcoma (AFS), ameloblastic fibrodentinoma (AFD) and ameloblastic fibro-odontoma (AFO), whose nature and classification are still a matter of debate, and odontomas, which are hamartomas. AA is an epithelial odontogenic tumor recently recognized as an entity. It shares microscopic overlapping with other odontogenic tumors, including ameloblastoma, which harbors BRAF p.V600E, and adenomatoid odontogenic tumor, which harbors KRAS mutation. The analysis of the genetic basis of these lesions could improve the knowledge about their molecular pathogenesis and help defining molecular markers for diagnostic purposes. Odontogenic tumors and cysts can originate from the dental follicle, which is an embryonic structure. However, there is little information about the molecular events that triggers tumorigenesis. Pathogenic mutations in tumor suppressor genes and oncogenes have been reported in normal tissues. Thus, the molecular analysis of dental follicle could lead to a better understanding of changes that occur in the early stages of odontogenic neoplasms and could assist indirectly in the prevention and directly in the early stages tumor detection. Therefore, the aim of this study was: 1) to investigate the profile of molecular changes in mixed odontogenic tumors, 2) to evaluate the pathogenic mutations in KRAS and BRAF in AA and 3) to investigate the mutational status of BRAF and KRAS genes in dental follicle associated with impacted teeth, since these mutations occur in a large proportion of ameloblastomas and adenomatoid odontogenic tumor. To achieve the first objective, a discovery cohort composed of mixed odontogenic tumors was sequenced by Next Generation Sequencing (NGS) using a hotspot mutation panel of 50 oncogenes and tumor suppressor genes. BRAF p.V600E was detected and confirmed by allele-specific real-time qPCR, and tested in a validation cohort, which included a total of 28 cases of mixed odontogenic tumors, with 22 being submitted to microdissection and laser capture, allowing to assess the status the mutational status of epithelial and mesenchymal components separately. The BRAF p.V600E pathogenic mutation was reported by the NGS in 2/4 samples from the discovery cohort. This mutation was detected in 4/10 (40%) AF, 3/4 (50%) AFD, 2/6 (33%) AFO and 2/3 (67%) AFS of the validation cohort, and it was found to be limited to the mesenchymal component in 7/9 mutation-positive cases. One case of AFS showed a remnant area of AF, with both mesenchymal components (AFS and AF) being positive for the mutation. Odontoma cases (5/5) were wild-type for the BRAF p.V600E mutation. To answer the second and third objectives, the BRAF p.V600E, KRAS p.G12V and p.G12R hotspot mutations were evaluated in a convenience sample of 9 AA and 48 dental follicles using allele-specific real-time qPCR. All cases of AA and dental follicle revealed wild-type status for BRAF p.V600E and KRAS p.G12V/R mutations. On the basis of the results, we conclude that AF, AFD, AFO and AFS present BRAF p.V600E in the mesenchymal component and that at least a subgroup of these lesions is molecularly distinct from odontomas. AA and dental follicles do not have BRAF p.V600E and KRAS p.G12V/R mutations, and if these do occur, they must occur at a very low frequency.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas GeraisCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em PatologiaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE PATOLOGIAhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessPatologiaTumores OdontogênicosSaco DentárioMutaçãoCarcinogêneseTumores odontogênicosAmeloblastoma adenoideTumor odontogênico mistoFolículo dentárioAlterações genéticasMutaçõesMAPKDNATumorigêneseInvestigação de mutações patogênicas em folículos dentários e tumores odontogênicosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINAL1. Tese final doutorado Bruna Coura.pdf1. Tese final doutorado Bruna Coura.pdfapplication/pdf9948198https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/55699/1/1.%20Tese%20final%20doutorado%20Bruna%20Coura.pdf7185338955047552d07e258544965de4MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/55699/2/license_rdfcfd6801dba008cb6adbd9838b81582abMD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/55699/3/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD531843/556992023-07-03 17:20:04.806oai:repositorio.ufmg.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2023-07-03T20:20:04Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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