Mecanismos moleculares da neutralização da atividade letal das toxinas escorpiônicas por anticorpos monoclonais e policlonais

• Autor(a) principal: Larissa Magalhaes Alvarenga
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/UCSD-84KJQN
• topic: Bioquímica; imunologia; Bioquímica; Toxinas; Tityus serrulatus Veneno; Escorpião Veneno Aspectos imunológicos

Esta tese trata de um estudo imunoquímico das toxinas ecorpiônicas. Quatro artigos foram apresentados dentro desse tema. No primeiro, um imunógeno detoxificado foi preparado. Para isso, a fração tóxica do veneno de Tityus serrulatus (TstFG50) foi conjugada a albumina bovina (BSA) com gluteraldeído e injetados em camundongos, para obtenção de anticorpos. Ensaios de proteção In vivo mostraram que os camundongos vacinados resistiram ao desafio de duas DL.50 da TstFG50. Nós usamos o método de SPOT para caracterizar os epitopos dos anticorpos protetores. Acredita-se os epitopos encontrados correspondam a regiões das toxinas que são conhecidas por estarem envolvidas com o sítio ativo.No secundo artigo, anticorpos monoclonais (mAbs) contra o veneno de Tityus serrulatus foram produzidos e caracterizados. A capacidade neutralizante dos anticorpos frente a TstFG50 foi determinada em ensaios de neutralização in vitro. O mAbTsl foi capaz de neutralizer 50% dos efeitos tóxicos produzidos pelo veneno do escorpião e mostrou uma inibição de 35% da ligação de TsVIl- l125 a sinaptossomas. Para mapear os epitopos reconhecidos pelo mAbTsl, nós usamos o método de SPOT. As propriedades neutralizantes do mAbTsl poderiam ser explicadas pela localização espacial do epitopo reconhecido, que apresenta resíduos próximos aos resíduos que compõe o farmacoporo das toxinas.Num outro artigo, a técnica de SPOT foi utilizada para caracterizar a ligação dos peptídeos da Tsll, TslV eTsVIl com os soros de cavalo anti-Ts de uso terapêutico. Todos anti-soros testados mostraram reatividade com os peptídeos das três toxinas. Os peptídeos reativos foram sintetizados, acoplados a KLH e usados como antígenos em microplacas de ELISA. A mistura dos peptídeos indicou uma relação linear entre título e potencial neutralizante para os soros de baixa potência. No entanto, o mesmo não foi visto para os soros de alta potência. Esta observação é discutida no contexto de que as toxinas apresentem epitopos contínuos e descontínuos.No ultimo trabalho foi feito um estudo imunoquímico de uma proteína atóxica, a Amm VIII. Esta proteína foi previamente isolada do veneno do escorpião Androctonus mauretanicus mauretanicus. Ela apresenta 87% de identidade com a AaH II, uma potente a- toxina, e mesmo assim não é tóxica para camundongos. No entanto, anticorpos contra essa toxina foram capazes de proteger camundongos do efeito letal da AaH II. Aqui, nós mostramos que Amm VIII induz anticorpos que reconhecem somente epitopos do tipo descontínuos. Análises da localização 3D dos segmentos peptídicos descontínuos-contínuos antigenicamente ativos destaca propriedades antigênicas da anatoxina Amm VIII e explica de maneira razoável a capacidade dos anticorpos anti-AmmVIII neutralizarem uma potente a-toxina, a AaH II.