Efeito da modulação da via da esfingosina na resolução da resposta inflamatória induzida por lipopolissacarídeo (LPS)

• Autor(a) principal: Denise Alves Perez
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/65659
• topic: Esfingosina; Membrana plasmática; LPS; Inflamação; Biologia Celular; Lipopolissacarídeos; Esfingosina; Membrana Celular; Receptores de Lipopolissacarídeos; Inflamação

A esfingosina, um importante esfingolipídio derivado da membrana plasmática, exerce um papel fundamental em vários processos celulares, incluindo, proliferação celular, angiogênese, envelhecimento e apoptose, No entanto, seu papel na resolução da inflamação ainda não foi elucidado. Neste trabalho, nós propusemos avaliar o papel da via da esfingosina no acúmulo e sobrevivência de neutrófilos na cavidade pleural induzida por desafio com LPS e em neutrófilos humanos in vitro. Para isso, camundongos (BALB/c machos) receberam uma injeção de LPS i.pl. (250 ng/cavidade) ou PBS (grupo controle). Primeiramente, a expressão dos receptores específicos de esfingosina 1-fosfato (S1P) foi avaliada em neutrófilos recuperados da cavidade pleural ou neutrófilos murinos isolados da medula óssea estimulados com LPS in vitro por qPCR e western blot. Posteriormente, foi avaliado o efeito dos tratamentos com inibidores da via da esfingosina (L-Cycloserine, DL-threo Dihydrosphingosine e CAY10621) bem como de antagonistas dos receptores de S1P (FTY720, JTE013 e CAY10444) no acúmulo de neutrófilos na cavidade pleural. As diferentes drogas foram administradas 4h após o desafio com LPS, tempo no qual já havia um grande acúmulo de neutrófilos, as células do lavado pleural foram coletadas 4h depois. Além disso, analisamos o efeito da administração de S1P na cavidade pleural com o objetivo de avaliar sua atividade inflamatória. Ensaios in vitro, utilizando neutrófilos humanos, foram realizados para estudar o efeito das drogas na apoptose deste tipo celular. Por fim, foi realizado um ensaio de eferocitose in vivo, a fim de avaliar o efeito das drogas na atividade de macrófagos. O desafio com LPS, tanto na cavidade pleural quanto nos neutrófilos in vitro induz um aumento da expressão dos receptores S1PR1, S1PR2 e S1PR3. A inibição farmacológica da via da esfingosina e os tratamentos com os antagonistas dos receptores de S1P diminuiu o acúmulo de neutrófilos na cavidade pleural, aumentou a apoptose dos neutrófilos e induziu a eferocitose no local da inflamação. O mesmo efeito foi observado em ensaios utilizando neutrófilos humanos, onde ocorreu um aumento de apoptose dos mesmos. Em conclusão, a inibição da via da esfingosina mostrou-se pró-apoptótica e pró-eferocítica, podendo representar uma estratégia terapêutica pró-resolutiva para o tratamento de inflamações neutrofílicas induzidas por LPS.