Produção heteróloga, em sistema procarioto, de proteínas estruturais dos vírus Zika e Chikungunya e avaliação de seu potencial para o uso em ferramentas diagnósticas

• Autor(a) principal: Flavia Fonseca Bagno
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/43375
• topic: Arboviroses, Zika virus, Chikungunya virus, diagnóstico, proteínas recombinantes.; Microbiologia; Infecções por Arbovirus; Zika virus; Vírus Chikungunya; Proteínas Recombinantes; Diagnóstico

As arboviroses tem se tornado um problema de saúde pública, causando grandes epidemias mundialmente. As semelhanças clínicas, a reatividade cruzada e a co-circulação de arbovírus no Brasil, como o vírus da Dengue (DENV), Chikungunya (CHIKV), Zika (ZIKV) e Febre amarela (YFV) dificultam o diagnóstico dessas infecções, sendo necessário o desenvolvimento de novas ferramentas de diagnóstico. Pesquisas anteriores mostraram que proteínas do envelope desses arbovírus são imunodominantes e associadas à geração de anticorpos, sendo, portanto, estrategicamente importantes para o diagnóstico sorológico dessas infecções. Este estudo teve como objetivo expressar, em sistema procariótico, proteínas do ZIKV e CHIKV com potencial antigênico. As sequências nucleotídicas codificadoras de ZIKV-E, CHIKV-E1 e CHIKV-E2 foram analisadas in silico, sintetizadas comercialmente, clonadas em pET-21 e expressas em Escherichia coli linhagem BL21(DE3). As proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade e avaliadas quanto ao seu potencial antigênico em Western-blot, utilizando soros de camundongo infectados, e ELISA, a partir do soro de pacientes humanos. Os ensaios de Western-blot confirmaram a reatividade das proteínas produzidas, sendo as mesmas reconhecidas tanto pelo anticorpo anti-his quanto por soros de camundongos infectados. Os resultados de ELISA demonstraram que, dentre as proteínas produzidas, CHIKV-E1 apresentou grande potencial para o diagnóstico sorológico da infecção, ao passo que as demais necessitam de mais aperfeiçoamento. Dado que as proteínas foram geradas com sucesso e as análises iniciais de CHIKV-E1 são promissoras, novos estudos deverão ser realizados, visando um melhor emprego dessas proteínas para um diagnóstico específico de infecções por CHIKV e ZIKV.