Avaliação morfológica do concentrado autólogo de plaquetas de cão sob refrigeração e criopreservação em DMSO 6%

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Diego Felipe Sanchez Arcila
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-AVKNY2
Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar as características morfológicas do concentrado autólogo de plaquetas (CAP) no cão, após refrigeração e congelamento. Foram empregados 31 cães (20 fêmeas e 11 machos), de diferentes raças e idades, que se apresentaram no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) para tratamento ortopédico com indicação de terapia celular. Foram coletados nove mL de sangue da veia jugular, dos quais sete foram depositados em tubos de 8,5 mL contendo ACD-A como anticoagulante para a obtenção do CAP e, dois mL em um tubo com EDTA para a contagem de plaquetas, determinação do volume plaquetário médio (MPV) e da amplitude de distribuição plaquetária (PDW). O sangue foi centrifugado a 191g durante seis minutos (única centrifugação) para a obtenção do CAP. Na amostra fresca foram avaliadas a contagem plaquetária, o MPV, o PDW e morfologia celular. A avaliação morfológica foi realizada a partir da contagem de 200 plaquetas sob microscopia óptica que foram classificadas quanto à sua forma em inativas (forma discóide), incertas (perda da forma discóide sem presença de pseudópodes) e ativadas (com emissão de pseudópodes). Quatro amostras de cada animal foram encaminhadas para conservação, sendo uma refrigerada a 4°C por sete dias, outra por 30 dias e mais duas armazenadas em freezer a -80°C no mesmo intervalo de tempo, utilizando dimetil sulfóxido (DMSO) 6% como crioprotetor. Após este período, as amostras foram descongeladas em banho Maria a 37°C, e como as refrigeradas, foram submetidas às mesmas análises laboratoriais da amostra fresca. Verificou-se diferença entre as amostras fresca e conservadas quanto à contagem plaquetária, a concentração celular, ao MPV e ao PDW (P<0,05), exceto no grupo refrigerado por 30 dias, que mostrou alterações morfológicas graves. No grupo congelado por sete dias, não se observou diferença quanto à porcentagem de ativação (P>0,05). Os resultados obtidos levam a concluir que a criopreservação com DMSO 6% a -80°C por sete dias é uma opção favorável para a manutenção das concentrações plaquetárias e das características morfológicas do CAP em cães.
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O sangue foi centrifugado a 191g durante seis minutos (única centrifugação) para a obtenção do CAP. Na amostra fresca foram avaliadas a contagem plaquetária, o MPV, o PDW e morfologia celular. A avaliação morfológica foi realizada a partir da contagem de 200 plaquetas sob microscopia óptica que foram classificadas quanto à sua forma em inativas (forma discóide), incertas (perda da forma discóide sem presença de pseudópodes) e ativadas (com emissão de pseudópodes). Quatro amostras de cada animal foram encaminhadas para conservação, sendo uma refrigerada a 4°C por sete dias, outra por 30 dias e mais duas armazenadas em freezer a -80°C no mesmo intervalo de tempo, utilizando dimetil sulfóxido (DMSO) 6% como crioprotetor. Após este período, as amostras foram descongeladas em banho Maria a 37°C, e como as refrigeradas, foram submetidas às mesmas análises laboratoriais da amostra fresca. Verificou-se diferença entre as amostras fresca e conservadas quanto à contagem plaquetária, a concentração celular, ao MPV e ao PDW (P<0,05), exceto no grupo refrigerado por 30 dias, que mostrou alterações morfológicas graves. No grupo congelado por sete dias, não se observou diferença quanto à porcentagem de ativação (P>0,05). Os resultados obtidos levam a concluir que a criopreservação com DMSO 6% a -80°C por sete dias é uma opção favorável para a manutenção das concentrações plaquetárias e das características morfológicas do CAP em cães.The objective of this study was to evaluate the morphological characteristics of autologous platelet concentrate (APC) in the dog, after refrigeration and freezing. Thirty-one dogs (20 females and 11 males) of different races and ages were submitted to the Veterinary Hospital of the Federal University of Minas Gerais (UFMG) for orthopedic treatment with indication of cellular therapy. 9 mL of jugular vein blood were collected, seven mL were deposited in 8.5 mL tubes containing ACD-A as anticoagulant to obtain APC and two mL in one tube with EDTA for platelet count, mean platelet volume (MPV) and platelet distribution width (PDW). The blood was centrifuged at 191 g for 6 minutes (single centrifugation) to obtain APC. In the fresh sample, the platelet count, MPV, PDW and cell morphology were evaluated. The morphological evaluation was performed by counting 200 platelets under optical microscopy that were classified as inactive (discoid form), uncertain (loss of discoid shape without pseudopodia) and activated (with pseudopod emission). Four samples of each animal were sent for storage, one refrigerated at 4 ° C for seven days, one for 30 days and two stored in a freezer at -80 ° C in the same time interval using 6% dimethyl sulfoxide (DMSO) as cryoprotectant. After this period, the samples were thawed in a 37°C water bath and, as the refrigerated ones, were subjected to the same laboratory analysis as the fresh sample. There was a difference between fresh and preserved samples for platelet count, cell concentration, MPV and PDW (P<0.05), except in the group refrigerated for 30 days, which showed severe morphological alterations. In the frozen group for seven days, no difference was observed in the percentage of activation (P>0.05). The results obtained lead to the conclusion that cryopreservation with 6% DMSO at -80 ° C for seven days is a favorable option for the maintenance of platelet concentrations and the morphological characteristics of APC in dogs.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGRefrigeraçãoPlaquetas (Sangue)CriopreservaçãoCãomorfologiaconcentrado autólogo de plaquetasativaçãorefrigeraçãoCãocriopreservaçãoAvaliação morfológica do concentrado autólogo de plaquetas de cão sob refrigeração e criopreservação em DMSO 6%info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdiego_felipe_s_nchez_arcila.pdfapplication/pdf1673445https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/SMOC-AVKNY2/1/diego_felipe_s_nchez_arcila.pdfcd37c8ba1098ab2c2ec2420233d59557MD51TEXTdiego_felipe_s_nchez_arcila.pdf.txtdiego_felipe_s_nchez_arcila.pdf.txtExtracted texttext/plain124399https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/SMOC-AVKNY2/2/diego_felipe_s_nchez_arcila.pdf.txt2bea04d052d92ac5a1c3717f0d4335b7MD521843/SMOC-AVKNY22019-11-14 11:53:39.746oai:repositorio.ufmg.br:1843/SMOC-AVKNY2Repositório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T14:53:39Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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