Leishmaniose visceral canina: estudo histológico e imuno-histoquímico renal com ênfase na fibropoese

• Autor(a) principal: Adriano Francisco Alves
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AYKJUP
• topic: Fibrose; Rim; LVC; L infantum; Rim/patologia; Imuno-histoquímica; Leishmaniose visceral; Fibrose; Rim/anatomia & histologia; Cães

Os estudos das alterações da matriz extracelular (MEC) na leishmaniose visceral são, sobretudo, aqueles relacionados a deposição de colágeno (fibropoese). Na leishmaniose visceral canina (LVC) há estudos mostrando intensa fibropoese associada à inflamação crônica que se instala em vários órgãos como, pulmões (pneumonite intersticial), baço (esplenite esclerosante granulomatosa), fígado (hepatite granulomatosa), linfonodos (linfadenite granulomatosa) e rins (glomerulonefrites e nefrite intersticial). Todavia, de acordo com a literatura, não há uma caracterização mais detalhada da fibropoese renal, tanto glomerular ou túbulo-intersticial em cães natural ou experimentalmente infectados com parasitos do gênero Leishmania da espécie L. (L.) infantum. E mais ainda, não há descrição detalhada da anatomiapatológica de rins de cães experimentalmente infectados com L. (L.) infantum. No Brasil, o principal agente etiológico da LVC é a espécie L. (L.) infantum, mas trabalhos recentes têm demonstrado cada vez mais a participação de outra espécie viscerotrópica: a L. (L.) amazonensis. Assim, os objetivos desse trabalho foram os de estudar alguns aspectos anatomopatológicos de rins obtidos de cães naturalmente infectados com L. infantum quanto de cães experimentalmente infectados com duas diferentes cepas de L. infantum e uma única cepa de L. amazonensis, com ênfase especial ao processo da fibropoese. Oitenta e sete amostras de fragmentos de rim emblocados em parafina (acervo) foram assim distribuídas: (1) sessenta e duas amostras de rins de cães, sem raça definida, naturalmente infectados com L. infantum, com diagnóstico sorológico e parasitológico positivos, obtidos de Centros de Zoonoses, da região metropolitana de Belo Horizonte, MG, denominado grupo CNI; (2) cinco amostras de rins cães experimentalmente infectados com L. infantum cepa MCAN/BR/2002/BH401, na dose de 5x107 promastigotas/ml de L. infantum, via endovenosa, denominado grupo BH401; (3) onze amostras de rins de cães experimentalmente infectados com L. infantum cepa MCAN/BR/2000/BH400, na mesma dose e via do grupo anterior, denominado grupo BH400. (4) cinco amostras de rins de cães experimentalmente co-inoculados com L. infantum cepa MCAN/BR/2002/BH401 (BH401) e L. amazonensis cepa PH8 (FLA/BR/1967/PH8), denominados grupo Coinoculados Os cães desse grupo foram infectados com formas promastigotas de L. infantum na dose de 2,5x107parasitos /ml e de formas promastigotas de L. amazonensis na dose de 2,5x107parasitos/ml, ambas por via endovenosa, em uma única supensão. A infecção experimental ocorreu aos 11 meses de vida de cada animal para todos os grupos, e o intervalo de tempo da infecção experimental foi de dois anos para os grupos BH401 e co-infectados, e de dezoito meses para o grupo BH400. Todos os animais com exames parasitológicos positivos para Leishmania aos 6-8 meses após a infecção, e que se mantiveram positivos até o final do ensaio experimental; (5) quatro amostras de rim de cães da raça Beagle, dois anos e meio de idade, todos com exames sorológicos e parasitológicos negativos para Leishmania. A eutanásia desses animais ocorreu juntamente com as dos grupos BH401 e os Co-inoculados. Após análises histológicas pela microscopia óptica convencional, todos os animais, revelaram a fibropoese glomerular e intersticial, em menor ou maior intensidade, associadas respectivamente aos diferentes tipos de glomerulonefrites e a nefrite intersticial crônica. Entretanto, a frequência das lesões foi distinta entres os grupos. A fibrose foi nitidamente mais intensa no grupo BH401, seguido dos animais do grupo CNI. Estudo imuno-histoquímico para investigar alguns aspectos dos mecanismos dessa fibrose foi realizado tendo como alvo marcadores celulares para miofibroblastos (marcadores mesenquimais) como a alfa-actina (-SMA) e a vimentina. A citocina fator transformador do crescimento do tipo â(TGF-â) e as metaloproteinases (MMPs), enzimas celulares secretadas de forma inativa relacionadas ao remodelamento da MEC, do tipo 2 (MMP-2), 7 (MMP7) e 9 (MMP-9), foram também investigadas. Novamente, o grupo BH401, seguido dos Co-inoculados, foi o mais marcante para a visualização da expressão de todos esses marcadores quando comparados aos demais grupos. As glomerulonefrites do tipo membranoproliferativas foram mais frequentes nos grupos BH401 (75%) e CNI (75%). As glomerulonefrites do tipo membranosa (mediante diagnostico diferencial pela prata metenamina de Jones) ocorreram em todos os animais do grupo Co-inoculados e em alguns animais do grupo BH400 (33,3%). As glomerulonefrites do tipo esclerosante apareceram apenas nos animais do grupo BH401 (100%). Estudo morfométrico da celularidade glomerular e deposição de matriz mesangial visualizadas pelas colorações especiais do periodic acid shiff (PAS) e o tricromico de Masson confirmaram lesões mais marcantes no grupo BH401. Macrófagos mesangias L1 e CD163 positivos foram visualizados por microscopia confocal preferencialmente no grupo BH401 reforçando os achados descritos. A presença de formas amastigotas intracelulares de Leishmania, visualizadas por imuno-histoquímica, foi observada em especial no grupo BH401, seguido do grupo CNI, mas não visualizados no grupo BH400 e nos cães CC. Os resultados confirmam a fibrose renal com marcações intensas para -SMA, vimentina e TGF-beta, e MMPs, em especial do grupo BH401, indicando ser a cepa MCAN/BR/2002/BH401 uma boa escolha para o estudo das alterações renais no modelo experimental da LVC.