Avaliação da atividade biológica do peptídeo 3 semelhante à insulina (INSL3) nos testículos de zebrafish (Danio rerio) adultos

• Autor(a) principal: Luiz Henrique de Castro Assis
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A2GGBL
• topic: Biologia Celular; Citologia

A espermatogênese é um processo cíclico e organizado que resulta na formação do gameta masculino, o espermatozoide, a partir de células espermatogoniais indiferenciadas. Estas espermatogônias indiferenciadas podem sofrer divisões que resultarão na produção de células comprometidas com o desenvolvimento da espermatogênese (diferenciação) ou na produção de novas espermatogônias indiferenciadas (auto renovação), sendo o balanço entre estes dois tipos de divisão crucial para a manutenção da espermatogênese ao longo da vida reprodutiva do animal. A regulação do equilíbrio entre a auto renovação e a diferenciação das espermatogônias indiferenciadas em peixes adultos é um processo ainda pouco conhecido, particularmente nos aspectos relacionados à influência de fatores parácrinos. O INSL3 (peptídeo 3 semelhante à insulina) é membro da família relaxina de peptídeos expresso pelas células de Leydig nos testículos dos vertebrados. Em mamíferos, é sabido que o INSL3 é importante no processo de descenso testicular durante o desenvolvimento e para a sobrevivência de células germinativas durante a vida adulta. Em peixes, embora não ocorra processo de descenso testicular, o gene insl3 é altamente expresso pelas células de Leydig, não somente durante o desenvolvimento mas também durante a vida adulta, indicando a existência de potenciais funções biológicas ainda não identificadas conservadas ao longo do processo evolutivo. Estudos anteriores demonstraram que o hormônio anti-mülleriano (Amh), além de inibir a diferenciação espermatogonial e a produção de andrógenos, foi capaz de reduzir o efeito estimulatório do hormônio Folículo estimulante (Fsh) sobre a transcrição do gene insl3 nos testículos de zebrafish. Neste contexto, decidimos investigar se o Insl3 em zebrafish teria uma função antagônica àquela observada para o Amh. Assim, nossos estudos envolvendo cultura de testículo de zebrafish demonstraram que o INSL3 humano (hINSL3) aumentou o índice de proliferação de espermatogônias do tipo A indiferenciadas (Aund), ao mesmo tempo em que reduziu o índice de proliferação das células de Sertoli associadas a este tipo espermatogonial quando estas células germinativas apresentavam-se em proliferação. Ainda, experimentos em cultura utilizando-se testículos de zebrafish com espermatogônias pré-marcadas com BRdU in vivo mostraram que o hINSL3 reduziu a área e o número de cistos de espermatogônias do tipo Aund no parênquima testicular, enquanto a área ocupada por cistos de espermatogônias do tipo A diferenciadas (Adiff) mostrou-se aumentada. Estas análises morfométricas foram confirmadas pelas análises moleculares, nas quais o PCR quantitativo demonstrou que o hINSL3 reduziu de forma significativa a transcrição do gene nanos2, que é um marcador de espermatogônias indiferenciadas em zebrafish e outros vertebrados. Desta forma, concluímos que o hINSL3 promoveu a diferenciação das espermatogônias do tipo Aund em cultura de testículos de zebrafish. No entanto, nossos estudos não demonstraram ação moduladora do hINSL3 na produção e liberação de andrógenos. Finalmente, estudo utilizando-se animais com deficiência androgênica e de gonadotrofinas, em decorrência do tratamento in vivo com o hormônio 17-estradiol, mostrou que a transcrição do gene insl3 é drasticamente reduzida em condições favoráveis a auto renovação e, ainda, que a recuperação parcial da espermatogênese observada após a introdução do hormônio 11- cetoandrostenediona no tratamento in vivo foi independente da elevação dos níveis de transcrição do gene insl3. Neste contexto, nossos resultados indicam que o hINSL3 estimula a proliferação e diferenciação de espermatogônias do tipo Aund nos testículos de zebrafish sexualmente maduros independentemente da participação de andrógenos, potencialmente como um mediador dos efeitos do Fsh na espermatogênese.